SELDI蛋白质芯片技术在肿瘤标志物的研究中的应用.pdfVIP

SELDI蛋白质芯片技术 在肿瘤标志物研究中的应用 哈尔滨医科大学附属肿瘤医院 陈公琰 洪璇 王彦艳 路璐 张长海 随着恶性肿瘤发病率的显著提高，恶性肿瘤的早期诊断及早期治疗已经成为现阶段亟待 解决的问题。肿瘤在其不同的发病阶段，即使在没有任何症状的早期，在蛋白质水平方面就已 经发生了变化，而这些被认为在早期发生的蛋白质变化都有可能成为临床早期的诊断指标。 因此，肿瘤特异标志物的成功筛选成为恶性肿瘤早期发现及早期诊断的关键。 利用差异蛋白质组学的研究方法对肿瘤及正常或良性病变的差异表达蛋白质进行鉴定， 定量。表征，筛选与癌相关的蛋白标记已成为目前应用较广泛的方法。目前蛋白质组学研究主 要采用双向凝胶电泳(2一DE)和质谱技术(MS)。前者是蛋白质组学研究的基本实验手段，但 用于蛋白质组学研究具有一定的局限性，因此质谱技术以其极高的灵敏度和对结果的迅速获 得等优势广泛应用于蛋白质组学研究，尤其是恶性肿瘤特异性标志物的筛选。质谱技术的基 本原理是样品分子离子化后根据不同离子间的质荷比(M／Z)的差异来分离并确定分子量。应 用该原理，目前有三种技术被应用于蛋白质组学的研究：1)基质辅助激光解析电离质谱技术 (matrix-assistedlaser mass desorption／ionization ionization mass 雾电离串联飞行时间质谱技术(electrospraytime—of—flightspectrometry， laserde— mass sorption／ionization time-of-flight 对高分子量蛋白质和低分子量蛋白质的检测，第三种技术集蛋白质芯片和质谱于一身，具有灵 敏度高，样本要求低等特点，可同时检测高分子量和低分子量蛋白质，目前被广泛应用于恶性 肿瘤标志物筛选的研究。 一、SELDI蛋白质芯片技术简介 上建立起来的，并利用经过特殊处理的固相支持物或芯片的基质表面，制成蛋白质芯片。该技 术是结合色谱学／层析原理和SELDI—T0卜MS技术制成的新一代蛋白质生物芯片。它弥补 了二维电泳的不足，进一步提高了蛋白质分离和鉴定的速度。目前常用的是美国赛弗吉公司 (CighergenBiosystemsInc)开发的蛋白质芯片一飞行时间一质谱系统。 SELDI蛋白质芯片的组成 SEI。DI蛋白质芯片根据芯片表面的不同化学成分可分为化学表面芯片和生物表面芯片。 化学表面芯片可分为疏水、亲水、阳离子、阴离子和金属离子螯和芯片，通过这些芯片可以检 测未知蛋白质。生物表面芯片可分为抗体一抗原、受体一配体、酶一底物、DNA-蛋白质芯片等， 通过这种芯片可显示与之相结合的抗原和配体的不同相对分子质量的亚型，但多用于检测已 丘 524c=汇囱 中国临床肿瘤学教育专辑(2005) 知相对应的蛋白质，因此在肿瘤特异标志物的研究中应用较少。化学表面芯片具有可发现低 丰度、相对分子量小的蛋白质、灵敏度高等特点，并且要求样品量少，可直接检测不经处理的 尿液、血清、脑脊液、关节腔滑液、支气管洗出液、细胞裂解液和各种分泌物等，从而检测未 知蛋白，因此较广泛的应用于肿瘤特异性标志物的筛选。 SELDl蛋白质芯片技术的原理 该技术的原理是根据蛋白质物理化学性质的不同选择性地从待测生物样品中捕获配体， 将其结合在经过特殊处理的蛋白质芯片上，使用激光使在蛋白质芯片表面结合的待分析物电 离，形成质荷比不同的离子，据其在电场中飞行时间的不同绘制成质谱图，该技术可使被检测 的蛋白质离子化达到最高点，从而提高分析的敏感性和重复性。检测结果通过分析软件处理 可获得样品中各种蛋白质的信息如分子量、含量等，并进行差异性分析，从而寻找有意义的标 志物或质谱图谱。 二、SELDI蛋白质芯片技术在肿瘤标志物研究中的应用 自2002年SELDI蛋白质芯片技术应用于肿瘤特异性蛋白标志物的筛选以来，该技术取 得了飞速的发展，并且应用范围愈来愈广。 1．结直肠癌：结直肠癌的发病