根癌农杆菌转化条件优化的研究.pptVIP

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2017-08-19 发布于重庆
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根癌农杆菌转化条件优化的研究.ppt

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根癌农杆菌转化条件优化的研究.ppt

根癌农杆菌转化条件优化的研究优化条件：细胞生长状态：OD600值0.1-1.4 CaCl2浓度：100mmol/L、150mmol/L、200mmol/L、 250mmol/L 冻融时间： 1min、3min、5min、7min、9min 融化温度：28 ℃ 、37℃、42℃储存时间：3d、7d、15d、30d、90d 1. 农杆菌细胞生长状态对转化效率的影响取新鲜转接后培养不同时间的农杆菌(GV3101)制备感受态细胞，TSS缓冲液重悬：OD600在0.1-1.4之间，以OD600值约为0.6时的转化效率最高。 2. CaCl2的浓度对转化效率的影响分别用100mmol/L、150mmol/L、200mmol/L、250mm/L的CaCl2溶液洗涤并重悬细胞，在其他转化条件均一致的情况下，测定农杆菌的转化效率，结果以200mmol/L的CaCl2作为重悬液来制备感受态细胞时，获得了最高的转化效率。 3. 冻融条件对转化效率的影响速冻时间可能对转化效率有影响，首先用TSS缓冲液或CaCl2溶液重悬细胞，于液氮中速冻1min、3min、5min、7min或9min后，其他条件均一致测定农杆菌转化效率。 4. 融化温度对转化效率的影响以TSS缓冲液重悬细胞，液氮中速冻3min后，分别用28 ℃ 、37℃或42℃水浴处理5min。 5. 感受态细胞储存时间对转化效率的影响将感受态细胞冻存于-70℃不同时间，测定其转化效率，结果保存1个月后，TSS法制备的感受态细胞转化效率仍然保持在104。 TSS:7.0ml pH6.1 LB2.0ml 50% PEG60000.5ml DMSO(二甲基亚砜)0.2ml Mg2+ (0.1ml 1mol/l MgCl2 and 0.1ml 1mol/l MgSO4)0.3ml ddH2O * *