D变异型DⅣA型引起重度新生儿溶血病的研究.pdfVIP

SOCS1 基因，构建及鉴定过表达 SOCS1 基因的慢病毒载体，并体外转染未成熟 DC ；通过流式分选技术分 析 CD80、CD86 和 MHC Ⅱ等因子表达确定细胞表型；经 ELISA 检测 IL-12 、IFN-γ 等因子的分泌情况； DC 功能状态通过 MTT 方法分析其对淋巴细胞增殖的影响来验证。 结果 经基因测序及因子表达检测证实成功构建携带 SOCS1 基因的慢病毒载体，并转染 DC 获得 SOCS1 基因修饰的耐受 DC （SOCS1-DC ）。细胞表型分析显示 SOCS1-DC 均表达低水平的 CD80、MHC Ⅱ、CD86 等分子，呈现未成熟 DC 的表型，且能有效消除脂多糖（LPS ）对 DC 的成熟诱导作用。ELISA 检测则显 示 SOCS1-DC 组 IL-12 的分泌与对照组无显著差别，在LPS 刺激时，SOCS1-DC 组 IL-12 的分泌均明显低 于对照组 (P0.05) ；SOCS1-DC 组明显抑制了 Thl 类细胞因子 IFN-γ 的分泌(P0.05) 。MTT 实验表明 SOCS1-DC 组 DC 对 T 细胞的增殖有抑制作用(刺激指数 1.54±0.27)，而对照组(刺激指数 2.22±0.18)及空病 毒组（2.25±0.28 ）能明显刺激T 细胞增殖(P0.05) 。 结论 成功构建并转染携带 SOCS1 基因的慢病毒至未成熟 DC 细胞，抑制 DC 成熟，进而构建耐受 DC ， 验证其免疫学功能，为以后耐受性 DC 在临床的应用奠定实验室基础。 【关键词】细胞因子信号转导抑制分子 1；耐受树突状细胞；慢病毒修饰，免疫耐受 【作者简介】通讯作者：夏荣，教授、主任医师，博导，电话：021Email ：xiarongcn@126.com 基金项目：上海市自然科学基金项目面上项目（11ZR1405200） D 变异型 DⅣb 型引起重度新生儿溶血病的研究 章旭 1 李革飞 1 李剑平 1,2 （1 辽宁省血液中心 2 沈阳市干细胞临床应用研究中心，沈阳，110044） 【摘要】 目的 分析1例D变异体DⅣb型引起重度新生儿溶血病的原因及产生机制。方法 用间接抗球蛋 白方法（IAT ）确认样本RhD血型及抗体筛选和鉴定；采用序列特异性引物-聚合酶链反应（PCR-SSP ）方 法扩增RHD基因特异性的外显子1～10，测序分析RHD基因全长编码序列；同时检测特异性Rh盒子进行RHD 基因的纯合性测定。结果 母亲张某RhD血清学检测为阳性，产生抗-D抗体；PCR-SSP方法扩增RHD基因 特异性的外显子1～10，外显子7～9缺失，其余RHD基因外显子序列与标准序列相同；RHD基因是杂合性 + - 的RHD /RHD 型；张某之子RhD血清学检测为阳性，血清中存在抗-D抗体，直抗阳性。存在RHD基因特异 + + 性的外显子1～10。RHD基因是纯合性的RHD /RHD 型。结论 DⅣb型是RHD基因外显子7～9缺失，张某 是RHD基因部分缺失，产生抗-D抗体引起张某之子重度新生儿溶血病。 【关键词】 RHD基因；D变异型；DⅣb型；新生儿溶血病 Rh 血型系统是目前已知的 32 个人类红细胞血型系统中最复杂的一个。RhD 血型具有多态性，除 RhD 89 阳性和 RhD 阴性外，还存在多种变异体，包括弱D 、部分 D 及 DEL 型。现已有弱 D 、部分 D 及 DEL 型 献血者所献血液使 RhD 阴性受血者产生抗-D 报道[1-3]，因此，准确检出 RhD 变异体对输血安全有重要的 意义。我们在疑难配血检测中发现 DⅣb 型引起重度新生儿溶血病 1 例，现报道如下。 1 对象与方法 1.1 对象 2013 年 2 月 7 日中国医科大学盛京医院妇产科产妇张某术前备血发现交叉配血24 例不相合，送 我血液中心进行疑难配血。三批抗-D 试剂检测 RhD 抗原都是阳性，但是抗体筛选发现该孕妇体内产生抗 -D 抗体，选择 RhD 阴性血配血相合。2013 年 2 月 9 日产下一男婴张某之子，新生儿高胆红素血症，需换 血治疗。男婴 RhD 检测阳性，选择 B 型 RhD 阴性血 700ml 换血治疗，25 日治愈出院。 1.2 试剂和仪器 1.2.1 试