兔舍耐药大肠杆菌气溶胶向环境扩散地研究.pdfVIP

兔舍耐药大肠杆菌气溶胶向环境扩散的研究 姚美玲，张彬，柴同杰幸 (山东农业大学动物科技学院，山东泰安271018) 摘要：本研究采用Andersen．6级撞击式空气微生物采样器在两个采样日期对泰安市一兔场舍内及舍外顺风方向10、 50、100、200m空气中的需氧细菌总数及大肠杆菌、金黄色葡萄球菌浓度进行测量，并对分离到的大肠杆菌进行耐 药性分析。结果显示，在舍内动物粪便、舍内空气和舍外大气流中分离到的大肠杆菌有部分菌株对同一种抗生素具 有耐药性。这在一定程度上可以证明舍内环境微生物气溶胶包括耐药细菌可随气体交换传播到周围环境中，使其周 围环境受到微生物污染。 关键词：兔舍内外环境；微生物气溶胶；耐药菌：扩散：环境生物污染。 随着现代畜牧业规模化、集约化的发展，许多畜禽细菌性疾病逐年呈上升的趋势，为了有效的 预防和治疗动物疾病，在饲料、饮水或临床滥用抗生索等药物的现象普遍存在，造成了耐药细菌不 断地产生和扩散，这不仅给临床用药带来困难，而且导致在动物产品中的残留。柴同杰等(2003) 【1】指出源于畜禽舍的微生物气溶胶还借助舍内外气体交换，向环境传播，随着大气流扩散，造成环 境的生物污染，病原和耐药菌的散布，给附近社区居民的健康带来了极大的威胁。气溶胶是固态或 液态微粒悬浮在气体介质中形成的分散体系。微生物气溶胶是指分散相中含有微生物的气溶胶。在 畜禽舍内，由畜禽排出的微生物(体表、呼吸、排泄物)及饲料、水、垫料中的微生物经过风化、 腐蚀或者磨耗过程，通过空气气流弥散，与水、尘埃颗粒相结合，悬浮在空气中形成微生物气溶胶 【2】。大肠杆菌和金黄色葡萄球菌是温血动物肠道内的常在菌，也是病原菌或条件性致病菌。本研究 应用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌种，通过测量其在兔舍及其环境气溶胶中的浓度及耐药性 分析，探讨耐药性微生物气溶胶在环境中的传播方式。 l材料与方法 1．1兔舍情况本实验兔场包括四个半封闭式兔舍。兔舍为双列三层式兔舍，舍内有长毛兔或肉兔 240只，幼兔800只。兔舍自然通风，每日清理粪便一次。本实验分别于两个工作日收集样品。2005 时，舍内温度为22℃，湿度在66％，舍外风速1．7m／s。 ． 1．2样品收集空气样品分别取其舍内，舍外顺风方向10、50、100、200m，每个点在不同的位置 平行收集样品。在兔场外上风方向100m处收集空气样品作为对照。利用Andersen．6级撞击式空气微 生物采样器收集空气样品，采样器标准流量为283I．／minN。采样器使用前已经过高压灭菌，使用时， 每两次取样之间用70％酒精棉球擦拭消毒。采样器驱动时间根据采样点的卫生情况掌握在1-8rain， 以每个平板上的菌落数在30-300之间为宜。采样器放置高度为50．80cm。空气样品收集介质为血琼 脂平板(血琼脂基础加1％葡萄糖配置灭菌后加5％公绵羊血制成)。粪便、饲料样品随机在舍内不 同笼中收集，各5个样品。 13气载大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的分离和鉴定 13．1气载大肠杆菌的分离鉴定取血琼脂平板上革兰氏染色阴性短杆菌接种到伊红美兰琼脂平板 上，挑取伊红美兰琼脂上圆形、湿润、黑色带金属光泽的菌落进行纯培养，然后进行生化试验鉴定。 13．2气载金黄色葡萄球菌的分离鉴定取血琼脂平板上革兰氏染色阳性的葡萄球菌接种到高盐甘 露醇琼脂平板上，挑取甘露醇平板上的圆形、突起、光滑并产生黄色色素的菌落纯培养，然后进行 生化试验鉴定。 1．4粪便和饲料样品中的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的分离鉴定粪便或饲料样品O．59加入4．5mL 营养肉汤中，37。C培养24h，用接种环挑取一环分别在伊红美兰和高盐甘露醇琼脂平板上划线，挑 取可疑菌落纯培养后进行生化试验。 1．5药物敏感性试验按照Kirby-Bauer纸片法程序进行。菌株分离纯化后接种于营养肉汤培养基中， 98 然后将抗生素纸片贴于平皿培养基表面，每个平皿贴6种纸片，置于37。C，培养18．24h。结果判定 参照美国NCCLS规定的标准。 1．6数据统计气载细菌浓度的统计采用中间值表示，这种统计方法尤其适用于数量较少且数值浮动 较大的样本的统计，同时用最大值与最小值反应样品间数值的波动范围【4】。 2结果与分析 ． CFU／m3之间，大肠杆菌在1．0--4．1x102cro／m3之间，葡萄球菌在2．6-7．2x