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动物单克隆抗体的研究和进展 【前言】由于B淋巴细胞在抗原的刺激下增殖分化转变为浆细胞产生抗体。每一个B淋巴细胞只能接受单一的抗原刺激产生特异性抗体，从单个B淋巴细胞繁殖的细胞克隆可以得到均质的抗体叫单克隆抗体(monoclonal antibody),B淋巴细胞不能在体外无限增殖。单克隆抗体得特点是特异性强，具有抗原结合位点的特异性；因结合位点的单一性，有时不易捕捉抗原，一株单克隆抗体与抗原不易产生凝集反应或沉淀反应；抗体性质相同，容易纯化、标记。 自从1975年K?ehler和Milstein利用杂交瘤技术[1]以来，目前随着分子生物学技术的渗透,出现了各种特异的单克隆杭体,并得到广泛应用，其中包括人源单抗、基因工程单抗、双特异性单抗等同时综述了杂交瘤技术的各个环节在近年来取得的一些迸展,为研制高质量的单抗提供了更为简便而灵敏的手段。各种单克隆抗体不断涌现。研究最为深入的主要有：人-鼠嵌合单克隆抗体、人源单克隆抗体、基因工程单克隆杭体、双特异性单克隆抗体等。单克隆抗体的主要技术有免疫动物脾细胞分离、骨髓瘤细胞的准备、细胞融合、融合细胞的筛选与克隆、单克隆抗体的大量制备等 【研究进展】 人源化和人源性单克隆抗体的研究和进展 由于嵌合抗体异源性仍然很大，因此需要对鼠源抗体进行人源化改造，进一步人源化的方法很多, 主要是重构抗体和表面重塑技术。重构抗体就是互补决定区(complementarity determining region, CDR)移植，将鼠抗体的CDR 移植到人抗体的相应部位，这样人源化程度可达90%以上，目前该方法是人源化单抗最常用、最基本的方法。而表面重塑技术，即将鼠抗体框架区表面氨基酸的残基(surface amino acid residues, SAR)进行人源化改造。该方法是仅替换与人抗体SAR 差别明显的区域，在维持抗体活性并兼顾减少异源性基础上选用与人抗体表面残基相似的氨基酸替换。 虽然人源化抗体解决了鼠抗体的免疫原性等问题，但生产人源化抗体仍有很大的困难；人源化过程需大量繁复、昂贵的电脑模拟，需取代不同的氨基酸以恢复选择性和亲和力，工作量非常大，并且它总还含有少量鼠源性成分。完全的人源性抗体才是用于治疗的理想抗体，目前它主要通过3 种途径来研制：噬菌体抗体库技术、核糖体展示技术和转基因小鼠制备人源性抗体。 通过免疫的、 天然的以及合成的抗体库展示技术[2] 或者是利用转基因小鼠[3] 虽然可以获得人源单克隆抗体， 但是经进一步改造传统的杂交瘤技术 ,所制备的大量鼠源单克隆抗体，仍然是目前开发用于人类疾病治疗的一种可能途径和源头。如若将这些特异性和亲和力较强的非人源单抗进行人源化改造后， 仍然比从头开始以新的靶点来开发治疗性单抗制剂更有应用前景。?2006年 Staelens 等用表面重塑的方法改造了抗血管假性血友病因子 鼠单抗 82D6A3 ，将抗体可变区1O个鼠源氨基酸残基替换为人源残基， 获得了很好的结果[4]。表面重塑技术优于移植重构技术， 在设计人源化抗体时更简单一些， 因为该技术仅需改变表面残基即可，而保留了大量内核的非人源残基。 1.2 嵌合单克隆抗体的研究和进展? 抗体的恒定区是抗体分子结构中免疫原性最强的部位，而决定抗体特异性的是抗体的可变区。从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人Ig 恒定区的基因连接,再插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人- 鼠嵌合抗体。也就是将鼠源性单抗在保留其抗原结合活性的基础上，尽可能的去除鼠源化部分或代之以人源化片断，减少了鼠源性抗体的免疫原性，从而尽可能的减少单抗的异源性，同时保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力。但是这种抗体仍保留了30%的鼠源性，可诱发人抗小鼠反应(HAMA)。 嵌合抗体用人源抗体恒定区取代鼠单抗恒定区而构建的人-鼠嵌合抗体, 已被证实保留了其亲本鼠单抗的特异性抗原结合能力并能够降低免疫原性, 目前美国正式批准上市的 4个人2 鼠嵌合抗体产品在临床应用中取得良好效果。 嵌合抗体就是将非人源抗体可变区移植到人抗体恒定区,仍保留了原来鼠源抗体约 30 %左右的鼠源序列,其免疫原性虽有所降低, 但仍可引起不同程度的 HAMA[5]应答。无论 CDRs或 SDR s移植所构建的嵌合抗体与其亲本非人源单抗相比,其抗原的亲和力都有一定程度的降低,因为亲本非人源单抗框架区的某些氨基酸位点参与了抗原结合或者对维持抗原结合区 构象具有重要作用。同时在对大量的嵌合抗体研究中发现有时其生物学效应并不一定完全与预期设想相符[6]。 ? 1.3鼠源性单克隆抗体的研究和进展 自单克隆抗体制备技术问世以来，制备单抗的一般程序基本相同，从超免疫的供体中即抗原免疫的小鼠，获取脾细胞，再与骨髓瘤细胞融合，最后对单个细胞进行克隆，培养出能分泌单抗的克隆细胞。目前