荧光淬灭法研究绿原酸和人血清白蛋白间的相互作用.pdfVIP

第26卷增刊 分析试验室 V01．26．Suppl． Chinese 20Cr7一10 2007年10月 Journal of制ysislaboratory 荧光淬灭法研究绿原酸与人血清白蛋白间的相互作用 王俊俊，赵妍，曹皴，陈勇鬻 (湖北大学中药生物技术省重点实验室，武汉430062) 本文应用荧光猝灭法阐明中药有效成分绿原 通过计算可知，凡／，与[Q]线性关系良好。 酸与人血清白蛋白问的非共价结合特性。证明绿 作用温度37℃和47℃时的荧光猝灭过程速率常 原酸可静态淬灭人血清白蛋白的内源荧光，得到 数K分别为4551和5577L／tool。由于生物大分子 作用温度为37℃和47℃时，绿原酸与人血清白的最大动态猝灭过程的速率常数K100L／tool， 蛋白问的结合常数，结合位点数，以及二者间的 表明绿原酸对lISA内源性荧光的猝灭过程不是由 主要作用方式。 扩散控制的动态猝灭过程，而可能是静态猝灭过 l仪器和试剂 程。 日本岛津公司RF450型荧光光度计(带恒温 装置)，绿原酸(简称CA，Sigma公司)，人血清白 7．4瞄s．HCl缓 蛋白(简称lISA，Sigma公司)，pH 冲液，二次重蒸水，其他试剂为国产分析纯；3× 10。mol／L绿原酸水溶液储备液，1．0×10巧raol／L HsA水溶液储备液。 2实验方法 300 350 400 ^／rim mL 于10mL比色管中依次加人20．5mol／L的 图l绿原酸对HSA荧光发射光谱的影响 mL mL NaG溶液，2Tris-HCl缓冲溶液，2HSA储 [Q]I姒=o．2×10—5mol／L，[Q]强=0，0．4，0．8，1．2，1．6， 备液，用水稀释至10nlL，摇匀并恒温水浴预热10 2×10—5 mol／L，J：I。=286rim，r=37℃ mL放于4．5mL荧光池中，以286 min；取该溶液3 rim为激发波长、狭缝与发射狭缝宽度为10nm，在 3．2荧光给体一受体间平衡常数和结合位点数 300．400 rffn范围内扫描荧光发射光谱。用移液枪 根据静态猝灭反应平衡公式[21 lg[(Fo—F)／F] mi’ll。 分次加入绿原酸溶液10止，摇匀并作用6 =k鼠+厅埘Q]作图，得到如下线性回归方程： 3结果与讨论 作用温度为37℃时： 3．I绿原酸对啦t的猝灭机理 ． 实验选择了37℃和47℃两个蛋白药物作用