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一、菌种的衰退 菌种衰退（degeneration）是指由于自发突变的结果，而使某物种原有的一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 纯菌种 自发突变 突变个体 传代增殖 原始个体 不纯菌种 衰退菌种 第七章-2 菌种的保藏 第一节 菌种的衰退和复壮 （一）菌种衰退的现象 菌落和细胞形态改变 生长速度缓慢，产孢子越来越少 代谢产物生产能力下降，即出现负突变 致病菌对宿主侵染能力下降 对外界不良条件的抵抗能力下降等 （二）菌种衰退的原因 基因突变－－主要原因 1、有关基因发生负突变导致菌种衰退 2、表型延迟造成菌种衰退 在自发突变和诱变中，突变一般只作用于DNA的一条链，发生变异无法反映在当代表型上，突变的基因经DNA复制和细胞分裂后变成纯合状态，才会使表型发生变异，新的表型才能表现出来。 3、质粒脱落导致菌种衰退 连续传代－－加速衰退 不适宜的培养和保藏条件－－加速衰退 （三）菌种衰退的防止 控制传代次数 创造良好的培养条件 利用不易衰退的细胞移种传代 采用有效的菌种保藏方法 讲究菌种选育技术 定期进行分离纯化 二、菌种的复壮 狭义的复壮－－消极的措施 是指在菌种已经发生衰退的情况下，通过纯种分离和测定典型性状、生产性能等指标，从已衰退的群体中筛选出少数尚未退化的个体，以达到恢复原菌株固有性状的相应措施。 广义的复壮－－积极的措施 是指在菌种的典型特征或生产性状尚未衰退前，就经常有意识地采取纯种分离和生产性状测定工作，以期从中选择到自发的正突变个体。 菌种复壮的主要方法 纯种分离法 菌落纯（“菌种纯”分离菌落） 细胞纯（“菌株纯”分离单细胞） 通过纯种分离,可将衰退菌种细胞群体中一部分仍保持原有典型性状的单细胞分离出来,经扩大培养,就可恢复原菌株的典型性状。 宿主体内复壮法 对于寄生性微生物的衰退菌株，可通过接种到相应昆虫或动植物宿主体内来提高菌株的毒性，从最严重的寄主体内分离出复壮菌株。 淘汰法 将衰退菌种进行一定的处理（如药物、低温、高温等），往往可以起到淘汰已衰退个体而达到复壮的目的。 第二节 菌种的保藏 菌种是重要的生物资源，研究和选择良好的菌种保藏方法具有重要的意义。 一、菌种保藏的目的 菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。 二、菌种保藏的原理 首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏，最好保藏它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等。 其次应人为地创造环境条件（如：干燥、低温和缺氧），使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态。 尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌株 三、菌种保藏方法 各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。一种良好的有效保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。 斜面低温保藏法 石蜡油封藏法 砂土管保藏法 麸皮保藏法 甘油悬液保藏法 冷冻真空干燥保藏法 液氮超低温保藏法 宿主保藏法 （一）斜面低温保藏法－－常用保藏法 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏， 如此连续不断。短期保藏（一般可保存1～6个月）、简便、易行。但需经常传代、异变易、污染。 （二）石蜡油封藏法 此法是在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，使培养物与空气隔绝， 加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。中期保存（1-2年）。 （三）砂土管保藏法 （四）麸皮保藏法 （五）甘油悬液保藏法 （六）冷冻真空干燥保藏法 （七）液氮超低温保藏法：液氮超低温（－196℃） （八）宿主保藏法：适用于专性活细胞寄生微生物（动物肝脏） 其中，最有效的保藏方法属冷冻真空干燥保藏法和液氮保藏法。（可保存达10年）