小鼠肝细胞胰岛素信号转导的动力学研究.pdfVIP

广东医学 2006年1月第27卷第1期 · 33 · 结果分析有影响。当同一个实验室同一检验项目存在 [2] 中国实验室国家认可委员会技术委员会医学分委员会．医学实 2个以上的检测系统时，应进行方法比对和偏差评估， 验室质量管理与认可指南[s]．北京：中国计量出版社，2004：72 — 75． 判断其临床可接受性能，以保证检验结果的可比性。 [3] 国家质量技术监督局．检测和校准实验室能力的通用要求[s] 参考文献 (GB／T 15481—200O idt ISO／IEC 17025：1999)．北京：中国标准出 [1]冯仁丰．临床检验管理技术基础[M]．上海：上海科学文献出版 版社，2000：1—15． 社．2003：1—149． (收稿日期：2005—07—27 编辑：张素文) 小鼠肝细胞胰岛素信号转导的动力学研究* 丁慧荣 刘友平 李洪 何涛 段承刚 泸州医学院 生物化学教研室， 中心实验室(四川泸州646000) 【摘要】 目的 从细胞整体水平观察细胞内信号蛋白在胰岛素刺激下发生的动力学变化，找出胰岛素相关 信号蛋白的动力学改变及其对胰岛素信号转导最终生理效应的影响。方法 采用双向电泳及放射性同位素标记 技术，分析小鼠肝细胞在胰岛素(1OO nmol／L)持续刺激不同时间得到的胰岛素信号蛋白磷酸化水平发生的动力学 变化。结果 小鼠肝细胞胰岛素信号转导相关磷蛋白有数十种，其中磷蛋白She、MKP3等的时间动力学曲线均呈 峰型。结论 在细胞整体水平，胰岛素多条信号转导途径之间存在相互交流，这种相互交流对信号转导的最终效 应产生了复杂的整合和调控，使细胞对持续高浓度的胰岛素刺激产生了自适应控制。 【关键词】胰岛素 细胞信号转导 动力学 小鼠肝细胞 胰岛素可通过几条不同的信号转导途径实现其丰 刺激组胰岛素(100 nmol／L)分别作用0，5，20，60和 富多样的生物学效应。相关证据表明，胰岛素信号转 120 min，相应时间后将各组细胞放人液氮，以终止胰岛 导所产生的最终生理效应，是若干信号转导途径的综 素的作用。 合结果，这就是所谓的信号转导的复杂性【1,2J。但迄今 1．2．2 肝细胞的裂解及蛋白质的双向电泳 倒尽培 为止对这些信号转导途径的研究，几乎都局限于单个 养液，各瓶加细胞裂解液400 冰浴30 min。收集裂 蛋白或单个途径的“线性”方式的描述，所得结论大部 解液于 E．P管内(每组各收集一管)并离心 分来源于对体外“纯化”系统的观察和分析 3。本课题 13 200 r／min，30 min，取上清液按Bio—Rad DC法试剂 从系统的角度出发，采用双向电泳及放射性同位素标 盒操作手册进行蛋白质定量。采用 17 cm的线性IPG 记技术，对小鼠肝细胞磷蛋白在饱和浓度的胰岛素信 预制干胶条(pH 3 10)，每根胶条上样量150gg，按照 号持续刺激不同时间的磷酸化水平进行半定量分析， BIO—RAD公司的仪器说明书进行第一相固相pH梯度 在细胞整体水平观察细胞内胰岛素相关信号蛋白的动 等电聚焦，总伏时为80 000 Vh。随继进行第二相SDS 力学改变及其对胰岛素信号转导最终生理效应的 — PAGE。电泳结束后，将凝胶进行固定一干胶一放射 影响。 自显影。电泳及放射自显影重复两次。 1材料与方法 1．2．3 放射自显影图谱分析 采用PDQuest 2D分析