第五章 植物离体快.ppt

第5章 植物离体快速繁殖和脱毒技术 主要内容 快速繁殖技术（定义、实验程序、影响因素、应用） 组织培养中常见的现象（白化、玻璃化、褐化） 植物脱毒技术（原理、实验程序、鉴定、保存） 第一节 植物快速繁殖技术 快繁的定义 快繁的技术程序 影响快繁效果的因素 快繁的应用 一、快繁的定义 快速繁殖（rapid clone propagation）：也叫离体繁殖（in vitro propagation）、微体繁殖（Micropropagation），是指在无菌条件下，将植物体的器官、组织或细胞培养于人工培养基中，并辅以人工控制环境，使其生长出完整植株的繁殖技术。 微繁：跟常规的繁殖方法相比它是一种微型操作过程。 一、快繁的定义 离体微繁殖技术的应用，首先应归功于Morel，他在1960年首先建立了兰花离体繁殖的方法（原球茎繁殖）。 目前已有近400种植物的离体繁殖已获得成功，其中许多具有重要经济价值的花卉(如兰花、菊花、石竹)、果树(草莓、无籽西瓜、葡萄)、经济作物(马铃薯、甘蔗)、林木(桉树、杨树)均已在种苗生产上广泛应用，取得了巨大的经济和社会效益。 一、快繁的定义 荷兰是试管苗的生产王国 我国快速繁殖植物的种类达443种之多 微繁图片 二、快繁的技术程序 无菌材料的建立 芽苗的增殖 生根及移苗（驯化） 1. 无菌材料的建立 初代培养：取材 消毒 接种 培养 外植体的选择主要应考虑以下问题： 繁殖对象的品种典型性。 植物在自然条件下的繁殖特点 。尽可能取自然繁殖器官的适当部位作外植体， 外植体的取材部位和大小、生理状态。 2. 培养物的增殖 增殖方式： （1）. 腋芽增殖 腋芽进行离体培养时可不断生长，逐渐形成芽丛，反复切割和转移可不断形成新的芽丛，因此可在短时间内获得大量芽。 （2）、不定芽增殖 不定芽：从现存的芽以外的任何器官、组织上通过器官发生重新形成的芽称之为不定芽。 特点：繁殖系数高 遗传稳定性较好 继代次数有限 注意事项：激素浓度不能过高；避免使用2，4-D等活性强的生长素，以减少变异发生。 （3）、愈伤组织增殖 愈伤组织增殖培养：即愈伤组织继代培养以扩大愈伤组织量进而分化形成更多苗。 特点：成功率高，繁殖系数大，但遗传稳定性较差。 注意事项：降低激素浓度 对要求遗传稳定性高的品种一般不采用这一途径快繁。 （4）. 体细胞胚增殖 特点：增长率高；双极性免去生根环节。 问题：胚状体休眠的诱导和解除还难以把握； 部分物种胚状体诱导困难且成苗率仍不高。 这一途径仅适用于少量植物。 3、芽苗生根培养 基本培养基 1/2或1/4MS培养基 生长调节剂 IBA和NAA0.1-0.5mg/L 温度：比增殖培养略低 4.小苗移植驯化 生产用苗的培育： 炼苗－假植－定植－生产用苗 炼苗：适应自然环境 移植：洗掉附着的培养基，移植土壤采用人工调配的混合培养土（泥炭土、蛭石、珍株岩等）；土壤湿度不宜过大（影响通气、烂根）；空气湿度初期较大（微雾喷雾）。 定植： 三、影响微繁效果的因素 基因型 外植体 培养基和培养条件 继代培养 植株再生方式 三、影响微繁效果的因素 继代培养： 继代间隔与外植体大小有关：外植体大，继代培养时间短（3-4周）；外植体小，则继代培养时间长（5-6周）。一般继代时间延长变异增多。 形态发生能力的保持或丧失 培养中发生的变异：正比 三、影响微繁效果的因素 植株再生方式与变异率： 茎芽增殖〈腋芽〈 直接发生途径形成的芽〈 愈伤组织形成的不定芽。 使用低浓度的生长物质可减少变异。 四、快繁的应用及局限性 1. 应用 用于加速某些难繁殖或繁殖速度很低的植物，或某些需要加速繁殖的特殊基因型，如名贵花卉、优良资源、工程植株等等。 ?用于自然繁殖极易感染病毒的植物，如马铃薯、甘薯、甘蔗、香蕉、石竹、百合等等。 用于有性繁殖变异范围大而自然条件下又不易无性繁殖的植物，如非洲菊、花竹、紫罗兰等。 四、快繁的应用及局限性 2. 局限性 有些植物离体繁殖技术未过关 培养中的变异 培养苗的“玻璃化”和褐化 2. 快繁应用的局限性 （1）、培养中的变异问题 解决方案？ 激素、继代时间、植株再生方式、实验中的选择 2. 快繁应用的局限性 （2）、培养苗的玻璃化问题(vitrification ) 玻璃苗：离体繁殖中出现的材料（主要是嫩茎和叶片）质地半透明、叶片肿胀的畸形苗。 特征：茎、叶表面无蜡质，体内的极性化合物水平较高，细胞持水力差，植株蒸腾作用强。 负作用：生长缓慢、不易生根、繁殖系数下降。 2.