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扫描电镜标本制备 扫描电镜: 由电子束作为“探针”，在样品表面逐点轰击出二次电子，收集二次电子成象 充分暴露表面， 加以固定使之保持完好 临界点干燥 导电处理 1 暴露表面与固定 [目的]充分暴露表面， 加以固定使之保持完好 组织或器官的自然表面（如器管或肠腔的自然表面） 酶消化，低频超声振动，生理盐水喷射冲洗——清除表面附着的粘液或富于蛋白质的液体 细胞内部结构 冷冻断裂，蚀刻——暴露结构 戊二醛（GA）与四氧化锇两步固定 (1)1-3%GA1-2h (2) dd水冲洗 (3)1%四氧化锇1h (4)dd水冲洗 *暴露表面可在固定过程或固定后清洗过程中完成 2 干燥（临界点法） 在空气中自然干燥 表面张力破坏表面微细结构（水，乙醇，丙酮） 临界点干燥 临界状态 临界状态 临界条件 水：T=375oC, P=218atm × CO2(L)：T=31.4C, P=72.9atm 水—乙醇—醋酸异戊酯—CO2(l) 3 导电处理 [目的]将射入的电子导走，将热量导走, 同时增加二次电子产率 真空喷镀仪 镀膜厚度 取材并把表面冲洗干净 双固定GA，OsO4 冲洗0.1MPB 酒精系列脱水 醋酸异戊酯置换100%乙醇 临界点干燥 导电处理 * * 表面张力 水的表面有一层膜叫表面层。它处在气体与液体之间。液体表面层由于跟空气接触，与液体内部情况有所不同。表面层里分子的分布要比液体的稀疏些，也就是分子间的距离比液体内部的大一些。在液体内部，分子间的引力基本上等于斥力；在表面层中，由于分子间的距离比液体内部大，分子间的相互作用表现为引力。这种液体各部分间相互吸引的力，叫表面张力。在表面张力的作用下，液体表面有收缩到最小的趋势。 l g 封闭容器 初始： ρl ρg 加热： ρl ，ρg 临界点： ρl =ρg (无表面张力) （临界温度，临界压力） 45m 45m 10-15m 10-15m 10-15m 10-15m 100% 100% 90% (80%) 70% 50% 置换：醋酸异戊酯置换乙醇，~0.5h 脱水： 临界点干燥： 临界点干燥 样品置于样品室； 样品室充以液态CO2， △→15°C ,15min； △→40°C , 5min； 放出CO2气体。 在标本与金属底座之间形成连续的金属膜，金属底座与仪器外壳连接，接地 导电胶：石墨乳胶，掺银粉或铝粉的火棉胶 金属（膜）：Au, Au-Pd, Pt, Pt-C 离子镀膜仪