紫外可见分光光度计_演示文稿.pptVIP

紫外可见风光光度计 学习目的 1.熟悉分光光度计的使用方法 2.练习测绘吸收曲线的方法 3.掌握利用标准曲线进行微量成分分光光度测定 紫外可见分光光度计 成分的定性分析 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特性波长处的最大吸收峰(峰值)和波形图来判断某种物质是否存在。 基本组成 光源在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。 单色器 样品室 检测器 显示 朗伯一比耳定律(Lambert—Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时，溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。其常用表达式为： A=k×b×C (式中，∈为系数) 2.分光光度计原理 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量， 相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其 特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或 测 定该物质的含量， 3.操作步骤及使用方法 准备工作： 将以装好的仪器接入220V的市电，开机，同时开启所需光源（钨灯和氘灯，不需要用氘灯时请不要打开氘灯开关）。开机后仪器显示800-3，表示主机进入预热十分钟。 预热完毕后，显示器将显示HELLO，表示仪器可以进入工作状态。（在预热过程中，如果想直接进入工作状态，可以按STOP键进入HELLO工作状态。仪器要求开机后预热十分钟以使仪器工作更稳定。）仪器进入工作状态后，首先根据实际测量的需求调节好光源、波长、狭缝、滤色片。选择后即可准备好样品进行各种测量。根据所需的测量进入相应的测量功能（T、A、C）。测量工作 5.确定工作波长 6.建立工作曲线 7.测试带测样品 测量样品透射比（T）： 将参比、样品放入样品池，拉动样品池拉杆使参比的比色皿对准光线通道，按100%T键（调百），待显示 ｔ100.0　，然后打开样品池盖，按Clear键（调零），待显示 ｔ0000 ，盖上样品池盖再次按100%T键，待显示 ｔ100.0　，拉动样品池拉杆使样品的比色皿对准光线通道，按Enter键后等待显示结果 测量样品吸光值（A）： 将参比、样品放入样品池，拉动样品池拉杆使参比的比色皿对准光线通道，按ABSO键，待显示 A0.000　，然后打开样品池盖，按Clear键，待显示 A 0000 ，盖上样品池盖再次按ABSO键，待显示 A0.000　，拉动样品池拉杆使样品的比色皿对准光线通道，按Enter键后等待显示结果 测量样品浓度（C）： 在测量浓度之前，必须建立标准曲线才能进行浓度测量。如没有建立标准曲线则不能进行浓度测量，仪器会提示操作出错。 测量浓度应该按以下过程操作： A：建立标准曲线（共有三种方法选择）； B：工作曲线的修正（自己认为工作曲线没问题可以不修正）； C：测量浓度。 工作曲线的修正 工作曲线方程为C=K×A+B，最多测量标准液的样点为20个。因此在建立曲线时是选20个样点的平均值建立方程，因此总有其中的样点离曲线较远（坏点），可以剔除该样点来达到修正曲线的目的，方法是在建立完曲线显示K、B、R后按STOP键，则程序会自动剔除坏点，按一次STOP键则剔除一个坏点，最多可以有n-1次（n个标准液）。 7.测试带测样品 建立工作曲线以后，可以开始测试待测样品， 8.实验结果的处理 根据数据绘制表格： 吸光度-PH曲线（吸光度为纵坐标） 吸光度-显色剂用量曲线（吸光度为纵坐标） 吸光度-反应时间曲线（吸光度为纵坐标） 所得三条曲线上确定显色反应适宜的PH范围、显色剂用量范围和显色时间范围 标准曲线法 配置一系列不同浓度的标准溶液，以不含被测组分的溶液为参比溶液，测定标准系列溶液的吸光度，以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制吸光度-浓度曲线，称为标准曲线。在相同条件下测定样品溶液的吸光度，从校正曲线上找出与之相对应的未知组分的浓度，用于单组分的定量分析。 仪器的维护保养与注意事项 当显示错误信息时一定