外周血单个核细胞的分离.pptVIP

外周血单个核细胞的分离和鉴定 Department of Clinical Immunology, Guangdong Medical College Xu Jun-Fa 2010.11. 免疫细胞的种类 淋巴细胞：T细胞、B细胞、NK细胞等 单核－巨噬细胞 树突状细胞 粒细胞 免疫细胞的分布 外周血 免疫器官 胸腺、骨髓 脾脏、淋巴结 黏膜相关淋巴组织 组织 分离免疫细胞的目的 检测免疫细胞的数量和功能，观察机体免疫状态 免疫细胞的细胞生物学研究 免疫细胞的培养和建株 分离免疫细胞的样本来源 外周血 脾脏 淋巴结 胸腺 骨髓 分离免疫细胞的一般原理 根据各种免疫细胞的物理学和生物学特征不同将其分离 密度大小 表面标志 其它活性：吞噬、黏附等 外周血单个核细胞的分离 外周血细胞的密度 血小板：1.030-1.035 淋巴细胞和单核细胞：1.075-1.090 粒细胞：1.092 红细胞：1.093 聚蔗糖－泛影葡胺分层液法 一、原理 3. 离心分离：将细胞叠加在密度合适的分层液(1.075-1.09) 上层，经离心后细胞可分为不同的区带。 二、方法 抽血： 静脉抽血2ml(每大组)，用2滴肝素抗凝； 稀释：加2ml NS于抗凝血中，轻轻混匀； 叠加：在离心管中先加入1.5ml分层