生物采油解堵剂中产蛋白酶菌株的筛选及培养条件优化.pdfVIP

大 庆 石 油 学 院 学 报 第36卷 第2期 2012年4月 OF INSTITUTE Vol’36No．2 2012 JOURNALDAQINGPETROI．EUM ApL 生物采油解堵剂中产蛋白酶菌株的 筛选及培养条件优化 左佳敏1，何连芳1，张玉苍2，刘飞1 (1．大连工业大学资源开发利用研究所，辽宁大连116034}2．海南大学材化学院，海南海口570228) 擒耍：为研究生物酶采油解堵剂中产蛋白酶菌株的初、复筛选及培养条件优化，从大庆原油样品中筛选菌种，通过 水解酪素的透明圈实验及福林酚测蛋白酶酶活的方法进行菌株的初、复筛选；以蛋白酶酶活为优化指标．采用单因素实 验对筛选的产蛋白酶菌株的培养基及培养条件进行优化，优化最适培养基：可溶性淀粉为15g／L，蛋白胨为20g／L·酵母 膏为20g／L，Nacl为1．og／L，Cacl2为O．02g／L。N幻HP04为o．2g／L，NaH2P04为O．1g／I。，在初始pH为6，0、接种 u／mI．·为 量为5％‘体积分数)、温度为3l℃．摇床转速为160r／面n的条件下，培养72h后，菌株的蛋白酶酶活为551．O 复筛选菌株的蛋白酶酶活的22．92倍，即为菌株生长繁殖及代谢的最佳条件．能够获得更高的蛋白酶酶活，有利于后续 mN／m降低到作用后的30．s 实验的进行．结果表明：菌株产蛋白酶对原油作用效果为发酵液表面张力从作用前的56．2 mN／m，表面张力显著降低，还有降解降黏原油等效果，具有一定的研究价值． 关键词：生物采油；蛋白酶；菌株筛选l培养条件I优化 中图分类号：TE357．9 文献标识码：A 文章编号：1000—189l(2012)02一0096—07 O 引言 生物酶采油是近年来发展起来的具有较好油田开发效果和较高采收率的一项新技术．将生物酶应用 于油井驱油采油，可以改变岩石润湿性、降低油水界面张力、降低原油黏度等[1]，具有增产、增注、控水、堵 水、调剖、防砂等效果‘”，生物酶解堵剂作为采油解堵新技术受到国内外关注．美国ApolloSeparation TechnologyInc研发的新型、高效生物酶稠油解堵剂Apollo环保酶，在美国、墨西哥、委内瑞拉、印尼等国 以及我国中原桥口油田、百色油田等油井上的应用取得较好的效果[3-4]．中国东营盛世公司开发的SUN 生物酶，在胜利油田、菲律宾卡尔塔油田应用效果也很明显凹_7]．围绕高效、环保生物酶解堵剂的研究引起 人们广泛兴趣口。1…． 生物酶主要含有蛋白酶、纤维素酶、半纤维素酶以及表面活性剂类物质等[1”，其中蛋白酶在生物酶采 油解堵中起着一定的作用．当原油靠近蛋白酶等生物酶活性中心时，蛋白酶发生构象变化，产生“电子张 力”，使原油分子发生变形和活化，形成“酶一原油的契合物”，反应后释放出原油．分离释放的油滴快速聚 合，形成稀释油流，改善原油的流动性，疏通被堵塞的油、水通道，从而实现油井及管道的疏通解堵。1“．国 外关于蛋白酶用于油井解堵方面的报道很少．盖海防等及李道山等对生物酶驱油解堵(主要成分是蛋白 酶)进行研究，表明蛋白酶在生物酶解堵中具有一定作用n“”1．笔者从耐受石油的微生物中筛选产蛋白酶 菌株，并对其培养基及培养条件进行优化，达到降解降黏原油及大幅度降低表面张力的效果．该研究在降 解降黏原油，增加原油流动性，提高原油采收率等方面有着广阔的发展前景． 1 材料与方法 1．1材料 1．1．1 菌株 rDNA鉴定为铜绿假单胞菌． 从大庆油田原油样品中筛选得到菌种，经部分生理生化实验及16S 收稿日期：2012一02—28；编辑：任志平 基金项目：辽宁省1=业攻关计划项目(2009223003) 作者简