脂肪酶生物印迹研究进展.pdfVIP

中国生物工程杂志ChinaBiotechnology，2006，26(3)：78～82 脂肪酶生物印迹研究进展8 董斌1 宋锡瑾“+王杰2 (1浙江大学化学j二程与生物工程系杭州3100272浙江大学化学系杭州310027) 摘要脂肪酶是一种广泛应用的水解酶。生物印迹技术是一项新兴技术，它使脂肪酶在有机溶 剂中发挥更好的催化能力，如更高的活性和稳定性，从而扩大了脂肪酶作为生物催化剂在工业上 的应用。介绍了脂肪酶蛋白质的结构特点，脂肪酶生物印迹的过程和原理，对生物印迹过程中印 迹模板的种类和选择原则、保护剂的作用等主要影响因素进行了讨论，并对不同种类脂肪酶的生 物印迹条件和适用的反应及生物印迹效果作了归纳总结，指出了目前脂肪酶生物印迹技术存在 的问题和发展前景。 关键词生物印迹脂肪酶底物模板保护剂 脂肪酶是一种特殊的酰基水解酶，它能在油水界 1脂肪酶的结构特点 面上催化酯水解和醇解、酯合成、酯交换、内酯合成、多 肽合成、高聚物合成及立体异构体拆分等有机合成反 脂肪酶的特殊的结构特点导致其特有的应用价 应，因而是目前被重点研究的生物催化剂之一。该酶 值，脂肪酶区别于其他酯酶主要在于脂肪酶作用于油一 广泛应用于食品、医药、轻纺、日用化学品、精细化工等 工业领域，大多数酶催化反应是在水溶液中进行反应， 但是许多有价值的产品需要在有机相中台成，这就有 脂肪酶结构晶体学的研究结果_1．2J表明：脂肪酶的活 必要提高脂肪酶在有机溶剂中的反应性能。 性位点上有一个螺旋型的“盖子”，盖子的存在使酶的 生物印迹(bio—imprint)是一种通过酶与配体间的 活性中心与分子表面被隔开，盖子下面覆盖的是由疏 相互作用、诱导，从而改变酶的构象的方法，修饰过的 水基包围的、由亲水基组成的脂肪酶亲电区(也称作氧 酶与配体间的结合能力有一定程度的提高。该方法能 负离子洞)。对脂肪酶的化学修饰和固定化，或者是生 有效地提高脂肪酶在有机溶剂中催化活性、稳定性，因 物印迹对脂肪酶催化活性的改变，与“盖子”的重新定 而大大增加其作为催化剂的应用，如印迹脂肪酶在药 向排列不无关系【3。在配体的存在下，酶的“盖了”就 物中间体的拆分，酯的合成等过程中，都表现出较好的 被打开，含活性部位的疏水基团就暴露出来，这样就易 催化活性。但是，在印迹的过程中存在的很多不确定 于与底物结合了。 因素，可能影响印迹酶的性能。人们一般通过选择不 同的印迹模板、不同的洗脱剂和反应溶剂、添加保护剂 2生物印迹的过程和原理 (1yoprotectant)等方法，来提高生物印迹脂肪酶的催化 Klibanov等_4 o最早对生物印迹进行研究，用枯草 性能。本文就脂肪酶生物印迹过程中的主要因素作一 阐述。 剂)的缓冲液中沉淀、干燥，并在有机溶剂反应测得酶 的活性提高了1130倍，而在水溶剂中酶的活性没有改 变。他们认为，配体通过氢键与酶的基团发生作用，使 收稿日期：2005-07_21修回曰期：2005．11-94 酶的构象发生了变化，当配体离去后，在有机溶剂中酶 }国家自然科学基金资助项目(2027