微生物肥料中有效活菌数检测方法.pdf

维普资讯 西北农业学报 1999．8(4)：94~96 AcraAgricu[turaeBoreat[一~ Sinica 文章编号 1004—1389(1999)04-0094—03 ③ 微生物肥料中有效活菌数检测方法 李亚兰，张建 ／彭玉魁，关勘农，杨蓉 ——i百 窿谢试中心．杨应 7121o。) 5， 摘 要：对截生抽肥中有效活菌莪利定方击进行研究．从檩作步骤、菌落形态、稀释度设王、计敷选择、 结果计算与判定规则方面对秆业标准NY227—94的适用性进行了罩}证和修订补克．用馥进的方击培养所得 的菌体形态与标准茼俸基奉一致．且檩作规范、重量性南、姑果准璃可毒。 关键词：苎皇丝璺苎 亳苎塑苴墼 生 中圈分娄号；$144-34 文献标识码：A 1 材料与方法 供试生物固氮肥 由陕西渭南天丰生物固氮肥厂生产。 测定方法 ：菌悬液制备 称取菌肥样品l0g(精确至0．O1g)加入到 lOOml带玻璃珠的无菌水中， 静置 20min，充分振荡 30min，即得 l0 菌悬液。稀释 用无菌吸管吸取 5ml10 的菌悬液加入到 45 ml无菌水中，吸吹3次混匀成 lO 的稀释液 ，依次稀释至 lO 等浓度 (每个稀释度换 1支无菌吸管)。倒 平板 取融化并保温在 50℃的培养基 1瓶(250nli)，倒平板 1O个 (一种 菌)顺序编号，l0一、1O一、10 每一稀释度重复3个皿，对照 (CK)皿 1个。接种培养 用 lml无菌吸管由高稀释度向低稀释度分别吸 取0．1ml接种于平板上，用无菌刮铲涂匀，对照皿接种无菌水，在 28～30℃下培养 2～5d。检查计数 取出培养皿，于每个稀释度取5～1O个菌落的菌体，涂片染色，镜检确认后进行菌落计数。 2 不同类型苗落特征和苗体形态 微生物肥料 NY227--94标准根据不同类型菌种分成 5大类，但由于对不同类型菌落特征和菌体形 态缺乏直观印象，难以区别。要准确测定有效活菌数，则应全面掌握其特征形态，否则，再认真的培养观 察都将是徒劳的。 21 根瘸茵 人工培养的根瘤菌呈杆状，大小为0．5～0．9一1．2～1．3 m，G一菌，无芽孢，周生或端生 鞭毛，能运动，育荚膜，细胞 内常吉有折光性强的多聚B一羟基丁酸(PHB)颗粒，染色后显环节状。根瘤 细菌初生为杆菌，随根瘤发育，体积增大，变为棒状、。T形或 “Y 形等，称之为类菌体或假菌体 ，具有固 氮作用。根瘤菌属好气性中温菌，适宜pH为6．5～7．5。快生型在培养基上 3～5d即形成菌落，慢生型 需 7～10d。 菌落园形麈起 ，大小不一，表面光滑，边缘整齐有光泽，具粘液，呈乳 白色或无色半透明。菌体在 YMA培养基上为小杆菌，根瘤中的类菌体有 T“”、“Y”，G一反应，染色后呈环节状。 2．2 固氮茵 固氮菌属 (Azotobo~ter)园褐固氟菌 (Az．chroococcum )。细胞球状，常成对称 “8”字形 ，具 荚膜，G一菌。能分撼褐色素，好气性中温菌，适中性至微碱性环境，喜湿满土壤。固氟效率为 10～15mg N／g糖，其氮素又向外分泌而存在于胞内。 菌落园形隆起，表面光滑，半透明，粘液状，有的在培养后期产生褐色或黑褐色色素。菌体为较大的 单生或 “8”字形排列的球状细胞，细胞表面有较大的荚膜。 愎稿 日期-1999-07-23 任回日期-1999-10-21 维普资讯 4期 李亚兰等：微生物肥料中有效活苗数检测方法 -95- 2．3 硅酸盐细菌 俗静钾细菌，属胶质芽孢杆菌 (Boc．mucilaginosus)。该菌能分解正长石、磷灰石、玻 璃等，释放出磷、钾素，有改善土壤钾素营养的效果。 菌落园形凸起 ，状如水珠无色透明，表面光滑 ，用接种针挑取时菌落粘稠而富有弹性。菌体长杆状 ， 外有肥厚的椭园形荚膜，生长发育后期能形成椭园形芽孢 。 2．4 有机磷细茵 有机磷化物为核酸、植酸、卵磷酯及各种磷脂酸，能在细菌、放线菌、真菌的酯酶作用 下释放出磷酸而被植物吸收利