牛肌肉发育过程中COL1A1和COL3A1基因与表达变化分析.pdfVIP

牛肌肉发育过程中COLIAl和COL3A1基因的表达变化分析 张小辉，祁艳霞，李云雷，廖辉，郭钊，王丹丹 (河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471003) 前言 肉质是牛重要的经济性状，肌内脂肪含量和分布对肉质有重要的影响。脂肪组织属 于疏松结缔组织，有大量的细胞外基质成分，已有的研究表明，细胞外基质对前脂肪细 胞的增殖、分化和迁移有重要的调节作用。脂肪细胞外基质的主要成分是胶原，因此， 分析编码胶原的基因在牛肌肉发育过程中的表达变化，对研究肉质和肌内脂肪沉积调控 具有一定的意义。 材料与方法 选择发育正常的3月龄、6月龄、12月龄、18月龄和24月龄的南阳黄牛各4头，在无菌 条件下分别采集背最长肌组织，立即投入液氮中保存备用。用Takara公司的RNAiso plus试剂盒提取各组织总RNA。利用A：∞：A：舯确定RNA的纯度，通过0．896的琼脂糖凝胶电 泳检测RNA的完整性，用DEPC处理水稀释至1斗g／此备用。 分别将总RNA各300 strandeDNA Kit试剂盒合成eDNA第一链，以此cDNA第一链为摸板，用 Synthesis Ex Takara公司生产的SYBR⑩PremixII试剂盒进行荧光定量分析，COLlAl基因的 TaqTM 5’ 引物序列为C1S： AGCGGCGGCTACGACTTGAG3’和C1AS：5’ GCK：TCTTGAGGGTGGTGTCC 3’，扩增产物长度为136bp；COL3A1基因的引物序列为 C3S：5’CACAGAGGCTTT(谢rGGACG3’和C3AS： 3’，扩增产物长度为203 bp。以GAPDH基因为内标进行标准化，对所有样本进行3个重 复测定，并在每次试验时设阴性对照。 结果与分析 随着南阳牛月龄的增加，COLlAl和 COL3A1基因在背最长肌组织中的表达表现出 先降低后升高的趋势，见图1。COLlAl基因在 12月龄时表达量最低，与3、6和24月龄时相比 差异显著(P0．05)；COL3A1基因也是在薹墓◆挈 12月龄时表达量最低，与3月龄和24月龄相比 差异显著(P0．05)。在整个肌肉发育过程中 COLlAl的表达量L匕COL3A1高。 讨论 胶原蛋白(collagen)是肌肉中结缔组织的主要成分，由于胶原(主要是IⅡ型胶原) 能够在肌纤维间和肌束周围广泛分布并形成微细的原纤维网，因此，其含量和交联度在 很大程度上影响肉品的感官及加工品质。肌肉组织中胶原蛋白含量的增加与肌肉本身的 发育过程是同步的，而且随着动物年龄增长，肌肉组织中胶原纤维的平均直径及其分子 间的交联程度也不断增加，这是导致肉质发生变化的主要因素。在肌肉组织的发育过程 中，编码胶原蛋白的基因发生规律性的变化，在秦川牛上的研究表明，COLlAl、 COLlA2、COL3A1等编码细胞外基质的基因表达量与牛肉的肉质性状存在一定的相关 性。细胞外基质不仅影响肌纤维的发育，而且对肌内脂肪含量具有一定的调控作用，细 胞外基质中的胶原成分为脂肪细胞提供了良好的保护，因为成熟脂肪细胞中有一个巨大 的脂肪液滴，几乎充满了整个细胞质，这种结构很容易受到外力的挤压而破裂，细胞外 基质可以减少这种机械刺激对细胞的伤害作用，因此，在前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分 化的过程中，细胞外基质中的胶原等成分被大量合成。这些研究表明，肌肉组织中的胶 原不仅影响肌纤维的发育，而且对肌内脂肪含量有一定的调节作用，共同影响肌肉的嫩 度、颜色、风味、系水力等肉质指标。 关键词：牛：肌肉发育：COLlAl；COL3A1；基因表达