评价牛型布鲁氏菌疫苗免疫保护力小鼠模型与建立.pdfVIP

评价牛型布鲁氏菌疫苗免疫保护力小鼠模型的建立 易新萍1，叶锋1，谷文喜1，唐阳2，周超2，马晓菁1，马俊杰1，钟旗卜 1．新疆畜牧科学院兽医研究所，乌鲁木齐，830000；2．新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐，830052． 摘要：为建立评价流产布鲁氏菌疫苗株免疫保护力的小鼠模型，选取4～6周龄雌性BALB／c小鼠为实验动物，设置A19 免疫组(n=50)和非免疫对照组(n=70)。A19免疫组腹腔接种小鼠A19 后，非免疫对照组设为攻毒组与PBS对照组，其余小鼠都以3×104 别剖杀小鼠，取小鼠脾脏称重、细菌分离、病理组织学检测。结果表明攻毒15d和45d后的免疫组小鼠脾脏含菌数均低于非 明显轻于非免疫攻毒对照组。结果表明以BALB／c鼠为实验动物，以A19为疫苗参考株建立动物实验模型可以应用于牛型布鲁 氏菌疫苗免疫保护力评价。 关键词：A19株；小鼠模型；免疫保护 布鲁氏菌为细胞内寄生、兼性需氧性革兰氏阴性菌，它能引起多种动物及人的布鲁氏菌病(简称布病)。 疫苗预防是控制布病发展的重要手段之一，我国现有兽用布鲁氏菌病疫苗主要有牛型19号(S19)弱毒菌 年代从前苏联引进。实验研究表明，我国的牛型布鲁氏菌19号疫苗与国际标准的S19菌株序列上存在差异， catabolic S19疫苗株的赤藓醇代谢基因(Erythritol 不缺失Ery基因口1，国内对A19疫苗在小鼠体内的免疫保护效果评价未见相关报道。 牛型布鲁氏菌19号疫苗在防治牛布布鲁氏菌病方面具有较好的免疫保护效果，但常规血清学检测与诊 断方法不能将其与自然感染相区分，这对我国布鲁氏菌病防治与净化是不利的。为了克服现有布鲁氏菌病 疫苗的缺点，通过分子生物学技术对布鲁氏菌进行遗传改造而产生具有分子标记的疫苗株是一种有效的途 径[3-4J。国内外研究者对牛型布鲁氏菌19号疫苗进行遗传改造，构建了具有分子标记的A19缺失突变株哺蚓。 由于牛型布鲁氏菌A19疫苗的免疫靶动物为牛和绵羊，这为众多A19缺失突变株的动物免疫保护评价实验 造成一定难度。传统的方法是以豚鼠作为实验动物模型，但其饲养环境和条件要求较高，对布病极其敏感， 对A19缺失突变株的动物免疫保护评价效果影响较大。国内对构建的具有分子标记的缺失突变株大多只限 于其毒力、免疫原性、遗传稳定性测定，对其免疫保护力效果评估少有报道旧1。为此，需要建立一种简便、 经济适用且最接近自然生存体系的动物模型来完成这些研究。世界卫生组织(wHO)1997年确定了评估突变 株免疫保护能力的标准，是在强毒攻击后特定的时间内从小鼠脾脏或／和肝脏分离布氏杆菌数量的减少来 衡量u¨川。本研究以BALB／c鼠为动物模型，以A19为参照，建立了评价牛型布鲁氏菌疫苗株免疫保护力的 小鼠模型，以期为A19突变疫苗候选株的筛选及其免疫保护力评价奠定基础。 1材料与方法 1．1 菌株匠abortus2308株购自中国兽医药品监察所：牛布鲁氏菌病A19疫苗购自新疆天康畜牧生物技 术股份有限公司。 雌鼠饲养于新疆天康畜牧生物技术股份有限公司三级生物安全实验室的负压隔离笼具中。 1．3 andDickinson 主要试剂TS培养基和布氏琼脂培养基均购自Becton company公司。试管凝集实验 子标记疫茁研究(2009l1109) 作者简介：易新萍(1970-)，女，湖北公安人，兽医研究员，博士，主要从事布布鲁氏菌病诊断与防控技术研究 通讯作者：钟旗E-maihyyyzqok@yahoo．corn，Cll 一221～ 第四届中国兽药大会——兽医微生物学、兽医生物制品学学术论坛论文集(2012年) (SAT)抗原购白中国疾病预防控制中心传染病研究所。 培养2～3d至菌的生长对数期，将菌液分别稀释，根据不同梯度稀释菌液涂布布氏琼脂培养基平板上，37℃ 培养2～3d后计数。 CFU、1x103 7 CFU、1X 104CFU、1X 105CFU、l×106CFU、1×10CFU(菌落