堆肥微生物产生的生物表面活性剂的提纯表征.pdfVIP

第16卷第1期 厦门理工学院学报 V01．16No．1 2008年3月 JournalofXiamen of Mar．2008 UniversityTechnology 堆肥微生物产生的生物表面活性剂的提纯表征 傅海燕，黄国和，柴 天，金 磊，严 滨，石 谦 (厦门理工学院环境工程系，福建厦门361024) [摘要]从堆肥中筛选产生生物表面活性剂的茵种，然后对筛选得到的茵种于适宜条件下进行发酵 培养，得到生物表面活性剂．同时对生物表面活性剂发酵液进行萃取、柱层析等一系列的分离提纯，得到 较纯的生物表面活性荆及一种较好的提纯生物表面活性剂的方法，然后采用液质联用对提纯的生物表面活 性剂进行表征，结果表明该堆肥中产生生物表面活性荆的主要菌种为铜绿假单胞茵，其产生的生物表面活 性荆为鼠李糖脂． [关键词]堆肥；筛选；生物表面活性荆；生物表面活性剂产生茵 [中图分类号]x705【文献标志码】A [文章编号】1008—3804(2008)Ol一0037—06 O 引言 生物表面活性剂是由微生物产生的同时含有亲水基团和疏水基团的两性化合物，具有表面活性． 与化学合成的表面活性剂相比，它们除具有降低表面张力、稳定乳化液和发泡等特性外，还具有一般 化学合成表面活性剂所不具备的性能，如毒性较低、生物可降解、环境温和等[1。3】，近年来在环境工 程领域，特别是在被石油烃污染的土壤的修复中应用得越来越广泛．这主要源于生物表面活性剂还可 增加憎水性有机化合物与液相之间的接触面，从而增加憎水性有机化合物在水相中的溶解性，提高微 生物对污染物的利用HJ．从被石油烃污染的土壤中筛选产生生物表面活性剂的细菌，国内外有不少 J． 学者在这方面进行过研究p。7 生物表面活性剂在堆肥有机质降解的过程中也能够大量产生【8】，同时由于它能够作用于堆肥中 的固液相、气液相之间的界面，对改善堆肥有机质颗粒表面的液态膜微环境具有潜在作用，因此它有 可能提高堆肥效率．但是从堆肥过程中筛选出产生物表面活性剂的细菌，只有极少数学者提及一1． 而目前生物表面活性剂的应用受到其成本与性质的限制【l0|，从复杂发酵液中分离和纯化生物表 面活性剂占总成本的大部分【11l，因此，寻求一种较好的方法来提取和纯化生物表面活性剂是很重要 的，这将为其应用打下基础． 本文从堆肥中筛选出并鉴定产生生物表面活性剂的细菌，并通过酸化、萃取、柱层析等一系列的 实验，找到合适的分离提纯方法，并将该生物表面活性剂从发酵液中分离出来，最后对其进行表征． 1 实验 1．1菌种的筛选 1．1．1菌种来源 本实验室的堆肥样取自本实验室的堆肥过程中．堆肥中有机物的分解主要在中温和高温阶段‘住】， [收稿日期]2007—10—26[修回日期]2007—12—30 [作者简介]傅海燕(1979一)，女，福建龙海人，讲师，博士，从事环境生物技术研究． 万方数据 厦门理工学院学报 2008年 因此，本实验选取45℃和55℃下的堆肥产品作为样品，其中的微生物主要为中温菌和嗜热菌．将从 堆肥过程中取得的样品放置于4℃中保存待用．该堆肥的原料主要是一般生活垃圾，其主要成分见表1． 表1堆肥原料成分 ． ofthewastefor Tab．1’Components composting 1．1．2堆肥样稀释 将堆肥样10 g，倒入装有90mL无菌水的锥形瓶中，置于震荡箱中震荡20m_in，使堆肥样中的微 生物分散于水中，静置30rain，吸取1mL的悬液，放人9mL的无菌水中，制成本实验需要的 10～CFU·mL。1的堆肥样悬液． 1．1．3培养基 et