反义caveolin1对实质肿瘤细胞中β3半乳糖基转移酶7表达的调节作用_临床医学论文.docVIP

反义caveolin对实质肿瘤细胞中β3半乳糖基转移酶7表达的调节作用_临床医学论文 反义caveolin对实质肿瘤细胞中β3半乳糖基转移酶7表达的调节作用_临床医学论文 作者：秦芳， 杨玲焰， 姜智， 吴祁生， 徐岚， 闫石， 杨世蕊， 吴士良 【摘要】 目的： 研究反义caveolin对实质肿瘤细胞中β3半乳糖基转移酶7（β3GalT7）表达的调节，以期阐明caveolin与β3GalT7的相关性。方法： 运用脂质体介导转染人工合成的caveolin反义核苷酸（ASODN）至人类4种实质肿瘤细胞中，通过荧光显微镜、RT及蛋白质印迹检测β3GalT7表达的变化。结果： 转染反义caveolin后的4种实质肿瘤细胞中β3GalT7均有明显的增强。结论： 表明caveolin调节肿瘤细胞中β3GalT7的表达，且与β3GalT7的表达呈负相关。 【关键词】 β3半乳糖基转移酶7； caveolin； 反义核苷酸； 肿瘤细胞 　　［Abstract］ Objective: To research the modulation of the downma tumor cells.Methods： By means of the transfection to transfect the ASOND to four parenchyma tumor cells to detect the expression of β3GalT7. Results： The expression of β3GalT7 had been raised in the four cells after transfection of ASODN. Conclusion： Caveolin1 had a minus relationship with β3GalT7. 　　［Key words］ β3GalT7； caveolin； ASODN； tumor cells 　　多种肿瘤(如前列腺、乳腺、口腔等的肿瘤)的发生均与染色体7q31.1区内染色体缺失有关,编码caveolin的基因就位于7q31.1,推测caveolin可能对正常细胞的恶性转化和恶性增殖有抑制作用。caveolin由Clenney等发现,相对分子质量21 000～24 000,长178AA,其编码基因定位于7q31.1,有3个外显子。caveolin与细胞的恶性转化、恶性增殖、侵袭、转移以及信号传导有关,逐渐受到人们关注。多数事实支持caveolin是一种抑制肿瘤蛋白。用反义caveolin致使caveolin表达下调,并使NIH3T3细胞发生转化，caveolin表达显著降低［1］。Wu等［2］研究表明，人类结肠癌细胞株和结肠癌组织中caveolin的表达均下降,可能归因于同时检测到的caveolin水平下调。用蛋白质印迹法发现,无论在结肠黏膜还是间质,肿瘤组织的caveolin水平都明显低于正常。同时将caveolin重组表达于HT29和DLD1结肠癌细胞系,并将两种细胞注入裸鼠,观察肿瘤形成情况,与未转染的亲代细胞相比,转染细胞系形成的肿瘤生长缓慢、体积小,甚至检测不到。而且实验人员将裸鼠体内形成的肿瘤细胞进行体外培养,发现与已转染而未注入裸鼠的亲代细胞相比, caveolin水平下降，提示caveolin表达在细胞恶性转化、恶性增殖的过程中下调,这可能是肿瘤发生过程中一个普遍存在的现象。国外也有研究报道反义caveolin可使β3的表达有明显提高，而对β3的作用不甚显著。但是近年来研究发现某些肿瘤组织中caveolin呈高表达。如何解释caveolin在肿瘤发生过程中这两种完全相反的作用呢?本文通过人工合成caveolin的反义核苷酸(ASODN)，转染人实质性肿瘤细胞，研究caveolin与β3半乳糖基转移酶7（β3GalT7）的相关性，以期为将来的深入研究打下基础。 　　1 材料和方法 　　1.1 材 料 　　人喉癌细胞株Hep、人肺腺癌细胞株A549、人肝癌细胞株HepG2和人胃癌细胞株SGC7901均为本实验室保存。小牛血清购自上海华美生物公司；RPMI1640完全培养基：每升RPMI1640基础培养基（Gibco，美国）中，添加小牛血清100 ml，L谷氨酰胺0.292 g，NaHCO3 2.0 g，葡萄糖3.6 g，HEPES（Amresco，进口分装 ）2 g；胰蛋白酶购自Sigma公司；DEPC购自上海华舜生物工程公司；Oligo(dT)，Trizol，RNase Inhibitor，Suoercript IIRNase H Reverse transcriptase，Taq DNA聚合酶，dNTP Mix（10 mmol/L），10×PCR 缓冲液