基于斑马鱼模型的代谢组学GC%2fMS分析方法的初步研究.pdfVIP

基于斑马鱼模型的代谢组学GC／MS分析方法的初步研究 吴晓敏u，韩利文1，刘可春1，刘昌孝3 (1．山东省科学院生物研究所，济南，250014； 2．山西医科大学药学院，太原，030001； 3．天津药物研究院释药技术与药代动力学国家重点实验室，天津，300193) 摘要：目的：建立基于斑马鱼模型研究血管生成过程的GC／MS代谢组学分析技术和研究方 管内皮生长因子受体抑制剂PTK787进行处理24h，观察药物对斑马鱼仔鱼血管生成的抑制 作用。对斑马鱼仔鱼样本预处理方法、衍生化方法、GC．MS分析条件进行了考察。GC／MS 分析检测数据经过数据的标准化处理，采用SIMCA．P12．0软件进行代谢组学的模式判别分 析，观察斑马鱼血管正常发育生长和被抑制后的内源性代谢轮廓的偏移。结果：在 理技术(取样方法、仔鱼数量、破碎方法等)是斑马鱼区别于其他实验动物的重要实验环节。 通过比较，选择BSTFA．TMCS(99：1)作为斑马鱼样本的衍生化试剂。代谢组学分析结果显 示，对于斑马鱼血管正常发育和被PTK787抑制后的两种状态，PCA模式不能明显区分， 但是在PLS．DA模式对二者具有良好的区分，其中乳酸、L．脯氨酸、磷酸甘油酯、L-天门冬 氨酸、L．亮氨酸、胆固醇、L．异亮氨酸、壬酸、L．组氨酸、谷氨酸盐、鸟氨酸等代谢物对分 类具有重要贡献(VIPI)。结论：本实验对基于GC／MS的斑马鱼代谢组学方法进行了探索， 初步建立了适用于斑马鱼样本的代谢组学研究方法，对于药物引起的血管生成作用显示了良 好的区分作用，为利用代谢组学方法揭示血管生成类疾病的代谢性生物标志物奠定了基础。 关键词：斑马鱼：血管生成；代谢组学；GC／MS 基金项目：国家自然科学基金青年基金项目；山东省医药卫生科技发展计划项目 (2011QW015) 图l：PTK787对斑马鱼节间血管生成的抑制作用(A：正常对照组；B：PTK787(1 p．g／mL) 处理组，白色虚框范围为节间血管区域) 297 A 时 j e 0 B P O j 目5；i P 0 1 P 0 i e 0 2 P 0 P 0 0 e i： e 0 __ }川h，!+． {． h～．。ll_』m。l上。．．|Lj。}。儿Ju．』。、 J上k 时间一一 处理组；s：核糖醇内标) 5 厂、 厂—、、＼、j _ ＼ o· ＼ 』 ÷ ／ - ▲ 、 l ■ 1 f 一 l ▲ 尝0 I