应用Dot-PPA-ELISA检测猪链球菌病抗体地研究.pdfVIP

猪传染j卤 1)为主【l，2】。猪链球菌病在70和80年代曾在江苏 2)和S群的猪链球菌l型(Strep．8U西Type 流行， 诊断为C群链球菌。1998年夏江苏某地再次暴发类似猪病，以急性败血症为主，来势凶猛，发 病率和死亡率均较高，而且感染特定人群。其病原是否为链球菌，它属于何种链球菌，成为关注的焦点。 本试验证实此次流行的病原是猪链球菌2型，不是以往的C群链球菌，从而澄清了病原的归属问题，为今 后的防制提供了科学的依据。 由于链球菌的生化指标差异较大，因此仅以形态、培养和生化等表型特征难以将所分离的菌株准确归 类，应该用血清学方法进行鉴定【7，8】。包括自行分离的3株在内的6株猪链球菌1998分离株均凝集猪 链球菌2型的标准阳性血清，与猪链球菌1型标准阳性血清的凝集反应则呈阴性。同时链球菌的A、B、C、 D、F、G群的乳胶凝集试剂皆为阴性。血清学检测结果高度一致，不难得出病原为猪链球菌2型的结论。 动物试验结果表明，3株1998分离株对小鼠不致病，而家兔则较为敏感。这与国外报道的猪链球菡2型 的动物致病性试验结果相一致【l， 9】，而与C群或其它群的链球菌的致病特性相去甚远。 综上可见。此次链球菌病在猪群急性流行，且危害人类，结合培养特性及血清型鉴定，可以认定其病 原为猪链球菌2型。其致病特性和毒力因子有待进一步研究。不言而喻，用单一的C群链球菌疫苗已不足 以控制猪链球菌病的流行，此点应引起高度重视。 参考文献略 应用Dot．PPA．ELISA检测猪链球菌病抗体的研究 李金海曹三杰文心田 肖 驰 (四川农业大学动物科技学院．基因芯片实验室 动物疫病与人类健康四川省重点实验室 雅安625014) 随着我国集约化养猪业的不断发展，猪链球菌病已成为危害养猪业的一种重要疾病。特别是近年来2 型链球菌的流行，不仅给我国养猪业造成重大损失，而且还是一种人畜共患病。建立简便、快速、准确的 诊断方法对控制该病有重要意义，但国内外真正适用于临床的诊断方法还非常少，尚未见到用Dot—ELISA 行病学调查，免疫监测，以期达到有助于控制链球菌病的目的。 ‘ 1．材料与方法 1-1材料 球菌II型和大肠杆菌0因子血清购白中国兽医药品监察所：其它血清由本实验室保存：硝酸纤维素膜(NC)， 种猪场。 ， 1．2Dot—PAA—ELISA诊断膜载抗原制备 氏汁，抗原蛋白含量测定采用考马斯亮兰染色法、抗原总糖含量测定参照生物化学实验(第二版)方法进 行。 1．3Dot-PAA—ELISA检测猪链球菌操作程序 1．3．1诊断膜片的制各在NC膜的正面划4mmX4mm的小格。抗原用0．05MpH9．5CBS缓冲液稀释至适当浓 p H 度。用lO1微量加样器在小格中央滴加抗原1．0l，37℃I’2小时。将包被好的膜片放入含3％的双氧水 的PBST(0．01M 182 第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 后放入含I％BSA的0．01M 置4℃冰箱备用。 1．3．2放膜在膜片每个小方格的点样面的一角上做好标记。按划线剪成小片放入96孔微量反应板中， 并使点样面朝上。 IJ 1．3．3加待检血清用稀释液将血清作倍比稀释，加入反应板中每孔601，37℃作用50分钟，洗涤同上。 ul37 ℃作用50分钟，洗涤同上。 1．3．5加底物显色往孔里加入新配制的底物溶液(4．5mg4一氯1一萘酚溶于1．5ml无水甲醇中再加入5ml PBS混合，最后加入2u u 1双氧水，混合后立即使用)，每孔加入601，37℃作用15-25分钟，自来水冲 洗，终止反应，晾干。 1．3．6 结果判断试验设标准阴、阳性血清及膜片对照、酶空白、血清空白对照，对照成立方可判定。 诊断膜片上出现蓝灰色圆形斑点或与周围界限