珠蚌多糖的免疫调节作用的研究.pdfVIP

珠蚌多糖的免疫调节作用研究 陈文品吴皓金亦涛 (南京中医药大学海洋药物研究中心210029) 摘要目的：研究珠蚌多糖的免疫调节作用，以进～步研究其抗肿瘤活性。方法： 利用3H-TdR掺入法观察蚌多糖对正常小鼠和免疫低下小鼠T、B淋巴细胞转化增 殖作用的影响；利用放射免疫法测定珠蚌多糖对氢化可的松造模小鼠血奖cAMP 与cGMP水平：结果：珠蚌多糖可增强B淋巴细胞的转化增殖作用和降低血浆 cAMP／cGMP水平，促进机体免疫功能。 关键词珠蚌多糖淋巴细胞转化cAMP与cGMP免疫调节作用 珍珠作为一味常用中药，在中药药理论文献中曾多次记载关于珠蚌的性昧 功效和临床应用，《本草拾遗》日：“蚌内方妇人劳损下血．明目，除湿，止消 渴”。《本草再新》记载：“治肝热．肾衰。消肿止痛，托斑疹，解痘毒，清凉止 渴”。我国从80年代中期即有对生产养殖珍珠的贝类动物进行综合利用的研究， 广州军区药检所在1986年对来自上海郊县养殖的圆角无齿脊蚌的提取物进行肮 肿瘤作用的研究，结果表明该动物的提取物对体内lewis肺癌实体瘤的抑制率 可达58％．对B16黑色素瘤的抑制可达80％口’2】。本文从珠蚌的多糖成分出发来 研究其肮肿瘤作用．根据文献资料反应多糖成分主要通过免疫途径实现抗肿瘤， 因此本文首先对珠蚌多糖的免疫作用进行实验研究。 1、材料与试剂 1．1样品：珠蚌多糖提取物由本中心天然药化研究室提供。 浙江卫星机械厂)，LKBl219液闪仪(Denmark)。 药大学同位素室提供)．EDTA-2Na盐(北京鼎国生物技术发展中心)，无水乙醇 (A．R) 科大学实验动物中心提供。 12S 2、实验方法及结果 2．1。H-TdR掺入法测定珠蚌多糖对体外培养的T、B淋巴细胞增殖作用的 影响n’“。 2．1．1脾细胞悬液制备：将小鼠脱椎处死，浸泡于75％乙醇中 5—10分钟，于超净工作台中取脾脏，在不锈钢丝网(100止)上捻碎脾组织， 细胞液离心(2509，5min)后弃上清，经低渗处理除去红细胞．加入含10％4,牛 血清的RPMI—1640培养液卜2ml悬浮脾细胞。细胞增殖转化来增强机体免疫功 能，一般认为cAMP与cGMPR的生物学效应相反，有相互桔抗作用m’…：即cAMP 有抑制DNA合成及淋巴细胞分化增殖作用，而cGMP则促进DNA合成和细胞分化 增殖，因此在免疫学中cAMP具有抑制免疫的作用。cGMP具有啬免疫功能的作用。 实验结果表明：珠蚌多糖引起血浆中cAMP的含量降低、cGMP含量增加及 cAMP／cGMP的比值降低。说明多糖能促进细胞DNA合成．促进免疫细胞的分化增 晴．促进免疫功能的增强。从本实验可看出，无论是对体内淋巴细胞的转化还 是对cAMP与cGMP的影响，都可反应出珠蚌多糖有增强免疫的作用．这为我们 以后研究珠蚌多糖的抗肿瘤作用尤其是在多塘对免疫细胞、免疫分子方面研究 提供了很好的依据。 2．1．2加样：将所制得的脾细胞调细胞数为l×105个／ml，在96孔培 u g／m1)50u 养板中分别加入脾细胞悬液501、多糖(0、1、2．5、250、1000IJ 1、ConA(10u 1或LPS(60IJ g／m1)100IJ u 培养基补足2001．在37‘℃．5％cC0：培养箱中培养68小时。每孔加入怕一TdR u luCi／201．再继续培养6小时。结束后用多头细胞收集器收集细胞于49#玻璃 纤维滤膜上，8 POP00．4mg)，在LKBl219液闪仪上测定放射性活性。 结果见表1 结果表明珠蚌多糖在珠算细胞的体外培养中具有促进LPS刺激的B淋巴细 胞转化的作用，能促进B淋巴细胞的增殖，但对ConA刺激的T淋巴细胞的转经 在250ug／ml和100ug／ml的高浓度组具有抑制作用，其他剂量未见明显影响。 2．2珠蚌多糖对免疫抑SPJ,鼠淋巴细胞转化(H3一TdR渗入法)韵影响 Balb／c系小鼠。随机分成4组，每组7只，模型组与给药组皆腹腔注射给予 lOOmg／kg的环磷酰胺，连续三天。珠蚌多糖组小鼠腹腔注射，给药剂量见表2。 连续给药7天后处于所有小鼠。无菌条件下迅速