浙江省主要茭白品种的DNA多态性的研究.pdfVIP

浙江省主要茭白品种的DNA多态性研究1 张珏锋、吕仲贤、陈建明、郑许松、徐红星、陈列忠、俞晓平* (浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所，杭州310021) 摘要：采用RAPD技术构建浙江省12个茭白品种的指纹图谱。从50个随机引物 中筛选出稳定且多态性高的7个引物用于茭白DNA的PcR扩增，共产生45条DNA 片段，平均每个引物的扩增带为6．4条，其中15条具有遗传多样性，约占总DNA片 段的33．3％。利用相似性聚类分析对PCR扩增产物进行二态性数据分析，结果显 示：在相似系数2．1处可以将12个茭白品种分为6个聚类群，其中9个浙江本地品 种间的遗传距离较近，初步结果判定地域差异对遗传距离的影响较大。 关键词：茭白品种，RAPD，遗传距离，浙江省 随着浙江省产业结构的调整，茭白自2000年起成为浙江省种植面积最大的水生经济作 物，2002年全省种植面积已达2万hril2，年产量在50万t以上…。茭自主要为无性繁殖，茭白 新品种的选育主要根据茭白品种外观形态和农艺性状来进行定向筛选，同时茭农也经常性根 据需要对田间的菱自品种自行标记筛选f2】，因此目前浙江省正在种植的茭白品种同亲源关系 比较复杂和混乱。此外，由于茭农在茭白种植过程中普遍采用就近引种和自行命名，因此目前 茭白品种上有可能存在着同种异名和同名异种现象[““。茭白品种和筛选上存在的问题对茭 白产业的发展产生了很大影响，尤其是对茭白的品种布局和优质品种的进一步筛选产生了严 重的障碍，在分子水平明确浙江省主栽品种网的遗传差异已经迫在眉睫。 RAPD(Random AmplifiedPolymorphic Chaln 意序列的寡核苷酸片段为引物在未知序列的基因组DNA上迸行随机的PCR扩增。扩增产物 DNA片段的多态性反映了基因组对应区域的DNA多态性。通过对RAPD产物的统计分析，可 对其遗传背景和亲本选配提供分子水平的依据[，6’7-”。本文针对浙江省茭白种质资源和品种 筛选中存在的问题，用RAPD技术构建浙江省主栽茭白品种的基因组指纹图谱，以期从分子水 平探讨茭白品种遗传背景的差异。为茭白种质资源研究与遗传育种提供可靠的信息和理论依 据。 1材料和方法 作者筒介：浙江省自然科学基金青年科技人才专项(RC97018)。 *通信作者E—mail：Ltmt@1rail．II王．弓．曲 △获兰辱羹 ·39· 1．1材料 1．1．1供试品种 供试的12个茭白品种为浙江省不同茭区的主栽品种，于2003年的2—4月份分别从余 姚、绍兴、武义等地采集而来，将茭墩分成单管按小区种植，统一施肥和管理，到6—7月份茭白 处于分蘖期时采集倒二叶叶片作为分析样品。供试品种名称和具体来源见表1。 表l供试茭白品种的名称和采集地点及时问 1．1．2引物 用于此次实验的引物均购自上海生工生物工程技术服务有限公司。用河姆渡双季茭作为 模板对50个lO碱基的引物进行筛选，从中筛选出扩增稳定、条带丰富的7种引物。用于试验 的部分引物碱基顺序如表2所示。 1．2方法 1．2．1茭白总DNA的提取 取新鲜茭自倒二叶0．19，用无菌三蒸水冲洗2—3次，将材料在液氮中研磨后装入16ml的 离心管．加入800(1c啪抽提液与2一巯基乙醇的混合物(比例49：1)，轻微振荡。65X：温育5分 钟后加入500(1酚一氯仿，轻微混匀，离心5min，将上层水相转移至另一离心管中。此步重复一 次。在所得上清液中加1／10体积3M(p8=5．2)的醋酸钠溶液和2倍体积O℃的无水乙醇后在 调整浓度后用于PCR扩增。 1．2．2PCR扩增 PCR反应体系25(1中含10m舯ris—Ha，pH ·40· 0-2mM (1。扩增反应在Thenno Hybaid公司Px2型PCR扩增仪上进行。PcR程序为：94。C】删n：92。C lmin，3CC lrain，72℃lmin；共柏个循环；726C延伸10mln；46C保存。 表2 RAPD所用随机引物及其序列 引物Ptin∞ 序列5’一3’ 引物him∞ 序列5’一3’ 些婴竺竺竖竺!燮