壳聚糖作为敏感膜材料地研究.pdfVIP

STC’99 壳聚糖作为敏感膜材料的研究 方华丰袁津玮周宜开任恕 (同济医科大学环境医学研究所，武汉，430030) ● 摘要 以壳聚耱为膜材料制成薄膜，运用生物索-亲和索系统将辣根过氧化掳酶(I-1艘， 化学发光体系，对水样中强量rlzO，进行检测，在l舻一l酽mol／L范围内线性关系良好，回归 nmol。本实验所研制的壳聚糖膜可制 方程：Y砬0．“8X．215．239(X∞01)，检测灵敏度为O．5 ● 成多功能敏感膜。 关键词壳聚糖，敏感膜，化学发光 一、前言 近几年来，固定化技术取得了较大的发展，很多生物活性物质被固定于电极表面，制成 专—性强、灵敏度高的生物传感器。通过选择适当的载体及圊定方法，可以大大提高生物活 性物质的稳定性，维持其生物活性。亲和素一生物紊之阐具有高度专一和强烈的相互作用，在 pH、温度、有机溶剂或变性剂等较大的变化范围内均能稳定存在，已广泛应用于蛋白质的固 定及生物传感器【l】，亲和素一生物紊系统的应用开辟了一类新的固定化方法，它可方便地设 计分子结构单元来赋予膜特定的功能㈨。 人们对壳聚糖用于固定酶等生物大分子很感兴趣【3】，主要是由于它无毒，具有生物相容 性等优良的生物学性能，制成膜后，无色透明，具有较好的物理机械性能，可制成自载膜， 它有丰富的氨基，可以与酶共价偶联。Krajewska等用戊二醛的方法将屎激酶围定于壳聚糖 膜上㈨．然而用这种方法根容易使壳聚糖膜变黄、变硬、变脆，膜根容易破碎，不宜用于制 备壳聚糖敏感膜，我们采用了一系列浓度的戊二醛和甲醛实验都得到同样的结果，因而在本 实验中，我们采用了一种新的固定化方法a 二、实验部分 2．1试剂和仪器 RI=3．0，siam)： ● 工二厂)；壳聚糖(脱己醺度8嘶)。 3．0X 5．OX 发光工作渡用n纽ol／LpIl8．5硼酸缓冲渡配制(含luminollff钿ol／L：％02 6．0X lOamDl／L：PIPlO、ol／L)，发光工作液临用前配制，静置2小时后使用。 2．2壳聚糖膜的制备 ● 用，调整壳聚糖用量后，可制得不同厚度的壳聚糖膜。 2．3壳聚糖膜吸永率的测定 319 取膜厚约45-50 定其吸水率。 X 吸水率=(h-Wd)脂s100％ (Ws：吸水后膜温重：Wd：膜千重) 2．4壳聚糖膜的生物素化 ● 取约20m 0．1mol／LNaEC03溶液ItmL，置于小烧期：中，室温振动反应4小时，然后置于4C冰箱中过夜。 用PBS反复洗涤，漫泡。 2．5壳聚耱膜上HRP固定 固定HRP采用LAB及[tAB两种方法，见图l。 AvidintoBiotin A)LabeledAvidintoBioxin B)Bridged