核酸探针检测猪繁殖和呼吸综合症病毒的研究.pdfVIP

!!!!堡垒国璺匡塑圭塑芏芏查生金堡襄塞 ·183· 核酸探针检测猪繁殖与呼吸综合症病毒的研究 S旨}8．2客 任慧暮’ 畅汊春 张瞬梅 李 华 黉芳芳 s蚕上2。6厂 中国农业大学动物医学院北京 Itj0094 *现工作单10：山末省莱日丁农学院动物科学系(265200) 利闰反转录 CR)技 摘要 聚合醇键式眨”；(RI 本打蜡出猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)美一载体．制备出地高辛标记的棱酸探针，建、j：原位杂交 VR2332 株ATCC ORE6硬邹分ORF7586bp约法捡删PRRSV，JⅢ报告如下。 cDNA。将PCR产物连接进纯牲克喹或体pGEM—T 1材料和方法 vector舌菇阳吐重组质粒。用EcoRI，曼Smal烈 easy 1．1 胃毒 待繁诅与ll于吸综台疗病毒(PRRSV) 酶切阳性重组质啦DNA，回收163bp的一1、片段芏眦AiCC VR一2332南北京动植物检疫同提供；PPRRS 此制蔷出地高辛抒记的慑酸豫针=rir目!》oz；’对4 化京分离侏B964由水教研窀分离并保r丁；待伪狂 头鼻内人工感染AICCVR2332啊，15H龄SPF褚犬病毒JE尿株及措细小病毒BM1侏由奉教研室保 感荣后不到玎目体由口々PRRSV分布进n了研宽。 存；(’株楮癌牛睾丸细胞毒由中监所提供： 结果显示．在感未后30h，即’r在高桃体、肺J11￡、睥脏、2÷r胆大肠朴苗JMl 09购于lromega公司。 肝脏、哥脏、胸昧、心脏、瞌、淑巴结、鼻啼t}、幔憾、暑 1．3 71 丑《J孟 p(jEMeasyvector试剂赢购于 丸、时睾等组织中检出痫毒，且一j持埕主，o!t女戈 (人工感染舌28dj。瘟用文计1f^工毒录PRRSV，二 M．公二J。 京分离株B96—4的4击SPF缮及4铡死抬昀组纪进 1．4-7『4*PS 行了捡驯，珂i7在肺f1淋巴结、啊豚．扛、帛F二休等组3’厦PR 3’南北 担中嵌J见阳峙杂交信号。进墨世果看明，制备咛咎酸 京赛百盛生物上程公司合成。 探针可f干错繁殖与呼n殳‘}合疗的】临压T}断。 1．3 PRRSV()RF6 p段PDNA均屯誊片{异硫氰 关键词 猪繁殖与u，啦t#合疽蠕毒；()RF6；地奇辛 酸胍法提取病毒RNA’．经RTPCR获得ORF6片 际|己琢针；原位杂安 段的c1)NA。通过，lA连接方式与pGEMi、easy 猪繁殖与呼吸综台症(简称PRRS)是目前危害IP L LG／X—Ga]的【．B甲板1．37J音养i=』_仪。 世界养稽业的主要疾病之 ，口『引碰母猪严重繁殖 1．6 阳性童址盾桎的篓定 挑水I,B半饭上蓝、自 障碍及不同H龄猜的呼吸道症状“’”。近几年来该 斑前落若_F，甩碱裂解法进仃质粒小捕提。电泳检杳 病在许多养猪场里潜伏性感染．常无明显的典掣症