利妥昔单抗耐药淋巴瘤细胞株构建及其表型分析.pdfVIP

中华肿瘤防治杂志 2015年 2月第 22卷第 3期 CHINJCANCERPREVTREAT，February2015，VoI．22 No．3 《实验研究／论著l 利妥昔单抗耐药淋巴瘤细胞株构建及其表型分析 王文廉 万里新 屈 中玉 南阳市中心医院肿瘤一病区，河南 南阳473000 【摘要】 目的 构建对利妥昔单抗 (Rituximab)耐药的淋巴瘤细胞株 ，并对其表型特征进行分析 ，为解决Rituximab的耐 药 问题提供新的思路 。方法 采用 “梯度加药法”在体外构建对 Rituximab耐药的人淋 巴瘤细胞株 Daudi—R。细胞毒性 检测试剂盒检测 Rituximab诱导亲代和耐药淋 巴瘤细胞 的补体依赖的细胞毒作用 (complementdependentcytotoxicity， CDC)、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependentcell—mediatedcytot0xicity，ADCc)，AnnexinV／PI双染检测 Rituximab对亲代细胞和抵制细胞的诱导凋亡作用 ，流式细胞术检测耐药细胞表面 CD20、CD55和 CD59的表达量 ，蛋 白 质 印迹法检测耐药细胞株细胞 内凋亡调节蛋 白的表达量。结果 1O、2和 0．4~g／mL的Rituximab能以CDC效应分别 杀伤 (86．4--4-4．08) 、(78．79±6．91) 和 (62．87土4．12) 的 Daudi—WT细胞 ，而对 Daudi—R细胞 的杀伤效应 分别 下降 至 (26．23土42．53) (t一25．08，P0．001)、(24．67士1．49) (t一15．43，P0．001)和 (17．99±2．33) (t一18．98，P 0．001)。二抗交联的 Rituximab诱导 Daudi—WT和 Daudi—R 的凋亡 率分别 为 (26．114-2．78) 和 (16．114-3．50) ，t： 3．877，P一0．018。诱导耐药后 3d，Daudi—R表面CD20的相对表达量为 Daudi—wT细胞表面(O．73士0．07)倍 (Dunnettt testI-J一一0．29，SE一0．091，P一0．035)，诱导耐药 10d后恢复正常，为 Daudi—WT细胞 的 (1．18±0．15)倍 ，Dunnettt testI-J一一0．18，SE=0．091，P一0．169)。流式细胞术证实耐药细胞表面膜结合型补体调节蛋 白CD55+和 CD59+ 的 细胞亚群分别从 Daudi—WT 的 (1．59士0．62) 和 (1．39±0．59) 上升至 (90．1±3．74) (t一一40．49，P0．001)和 (90．33士2．69) (￡一一54．4，P0．001)。蛋 白质印迹法结果表明，细胞 内凋亡抑制蛋 白Bcl-2和 Bcl—x1的表达量显著 上升，而凋亡促进蛋 白Bax和 Bak的表达量显著下降。结论 耐药淋 巴瘤细胞通过上调其表面补体调节蛋 白CD55、 CD59和细胞 内凋亡抑制蛋 白的表达和下调细胞 内凋亡促进蛋 白的表达 ，对 Rituximab介导的CDC和诱导凋亡作用产 生抵 制 。 【关键词】 非霍奇金淋 巴瘤 ；CD20；单克隆抗体 ；利妥昔单抗 ；耐药 中华肿瘤防治杂志 ，2015，22(3)：189—193 DevelopmentandcharacterizationofaRituximab—resistantlymphomacellline WANGWg一lian，W_AN Li-xin，QUZhong—yu A Cancer’ r ，NanyangCentralHospital，Nanyang 473000，P．R．China [ABSTRACT] OBJECTIVE Torecap