胱天蛋白9在高血压小鼠心脏炎症与纤维化中作用及机制研究.pdfVIP

胱天蛋白9在高IllL压小鼠心脏炎症和纤维化巾 作用及机制研究 【摘要】 研究背景 我国高血压发病率呈逐年上升趋势，其导致的高致残率、高死亡率，引起的心、脑、肾等靶器官损害严重威胁人类健 康。血压升高引起左室重构是发生心脏事件的一种重要的独立危险因素，可引起心肌缺血、心律失常、心功能不全甚至猝 死。新近认为，高血压是一种慢性炎症，在心脏纤维化过程中起重要作用，但其机制尚未阐明。传统观念认为，细胞质受 体胱天蛋白酶相关的募集域9(CARD9)在先天性免疫中起重要作用，目前研究证实其与肠炎，结核病，强直性脊柱炎等 炎性疾病关系密切。但CARD9在高血压心脏炎症和纤维化中的作用尚不明确。本研究以血管I紧张素II(AngII)诱导的高 血压小鼠为研究模型，以腹腔巨噬细胞为靶细胞，通过体内、体外实验，分别在组织、细胞、分子水平探讨CARD9在高 血压心脏炎症和纤维化中的作用及其机制，为预防或逆转高血压左室重构寻找新的治疗靶点提供依据，为指导临床治疗与 新药开发提出有力证据。 研究目的 II灌注复制小鼠高血压模型，采用病理学和分子生物学技术观察心脏组织中炎症细胞的浸润、炎症因子的表 通过Ang II灌流所引起的心脏炎症和纤维化中的作用。结合体外细胞实验明确CARD9在巨噬细胞炎症反应 达，探讨CARD9在Ang II诱导的高血压心脏炎症和纤 中的作用，揭示CARD9调控巨噬细胞炎症反应的信号途径。本研究旨在阐明CARD9在Ang 维化中作用及分子机制，为寻找有效的临床干预措施提供依据。 研究方法 II组(1500 II组(1500 陷小鼠灌注生理盐水组(对照组)，C组为野生鼠灌／主Ang ng／kg／min)，D组为缺陷小鼠灌注Ang II一周后小鼠血压较灌泵前升高，表示高血压小鼠模型复制 nedkg／min)。灌泵前及灌注第7天测量小鼠的血压，灌注Ang 成功。 2、灌注7天后，收获小鼠心脏，制备病理组织切片，组织水平上进行苏木精和伊红染色(HE)观察心脏病理结构的 变化： 3、Masson三色特殊染色病理观察心脏胶原纤维沉积情况，半定量分析胶原含量； 介素-1B(IL一1 达情况及半定量分析； 5、心肌组织冰冻切片，免疫荧光双染观察巨噬细胞中CARD9的表达； 6、提取小鼠心脏组织RNA，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定CARD9的mRN^水平； B 7、提取小鼠心脏组织蛋白。蛋白印迹实验(WesternBlot)测定核转录因子一gP65亚基(NF-K B／p65)，c-J。m氨 基末端激酶(JNKl／2)和p38及相应的磷酸化产物，B-actm蛋白含量； 8、小鼠腹腔巨噬细胞培养，与不同浓度的AngII共孵育，荧光素酶检测NF—K B／p65活性。 9、应用SPSSl3．0统计软件，采用了配对样本t检验，单因素方差分析方法。Po．05为差异有显著性。 研究结果 1、实验鼠基因型鉴定结果证实与所购小鼠基因型一致。 2、灌泵后小鼠血压水平明显高于灌泵前(Po．05)，测定结果证实高血压模型复制成功。 II后，免疫组化染色结果显示心肌中大豆CARD9阳性细匏浸润(P 3、与灌注生理盐水相比，野生鼠灌注Ang 0．05)，RT-PCR检测CARD9mR N^表达水平增高(p0．05)。免疫荧光双染结果显示心肌国苣噬细胞浸润增多且呈 CARD9阳性。 -，一一一。’。、、t ： 644：籀六园充京五溯哪曲管琦研t雪客 II