家蚕丝素固定化木瓜蛋白酶地研究.pdfVIP

全国桑树种质资源及育种和蚕桑综合利用学术研讨会 2005．II 家蚕丝素固定化木瓜蛋白酶的研究l 陈芳艳2，纪平雄3 (I华南农业大学动物科学学院，广东广州510642；2华南农业大学理学院，广东广州510642) 摘要t以丝素为载体，采用共价交联法制备固定化未瓜蛋白醇．研究结果表明，最佳的固定化条件为： 固定化酶活力为l786．93 u儋载体，活力回收高达69．54％．固定化酶的表现米氏常数K?[1络-fr白】为o．092 ％，是溶液酶的米氏常数K。的0．46倍；最适pH为7．5；pH稳定性在6．5—8．0；在4—55℃范围内酶活 力稳定；溶液酶的操作半衰期为38d，固定化酶为54(t．固定化酶的操作半衰期较溶液酶长． 关t词·丝素 固定化木瓜蛋白酶 酶学特性 中圈分类号：055 文献标识码：A 蚕丝由于其优良的服用性特征自古以来便是传统的服装用纤维材料。然而，随着科技发 展和对蚕丝副产品的综合利用开发不断的深入，为蚕丝应用于非纺织领域开辟了一条新路。 丝素为蚕丝脱胶后的丝心蛋白质，由于其特殊的氨基酸组成和结晶结构，大量的研究证明丝 素是一种优良的固定化酶载体，具有反应条件温和，反应性强，热安全性好等许多优点2川， 国内外研究人员已用丝素固定了多种酶强“1。木瓜蛋白酶是由木瓜乳汁经提炼而得到的一类 蛋白水解酶，主要用于防止啤酒冷浑浊、肉类的嫩化、蛋白质水解产物的制备、饼干和糕点 膨化、辅助消化药物等_’。为了提高木瓜蛋白酶的使用效率，降低生产成本，国内外研究人 员对木瓜蛋白酶的固定化进行了许多研究，建立了许多固定化方法8~¨‘。但用丝素固定木瓜 蛋白酶鲜见报道。本研究以丝素为载体，采用共价交联法固定木瓜蛋白酶，研究了木瓜蛋白 酶的最佳固定化条件和固定化酶的酶学性质。 1材料与方法 1．1材料 茧壳(由华南农业大学动物科学学院提供)；25％(W／W)戊二醛溶液(汕头光华化学厂)； 木瓜蛋白酶(动物科学学院化学实验室制备)；其余试剂均为市售生化或分析纯试剂 1．2木瓜蛋白酶溶液酶的制备及其活力测定 InL，过 称取0．1 mol／L的pH7．2的磷酸缓冲液并定容至100 g木瓜蛋白酶，溶于0．1 滤。制得0．64 mg／mL的木瓜蛋白酶液。酶活力的测定按徐凤彩陋’的方法。在测定条件下 每增加0．001个光吸收单位的酶量为1个酶活力单位(U)。 1．3固定化木瓜蛋白酶的制备及其活力测定 1基金项目：华南农业大学校长基金资助项目(5400-K00014) 2作者简介：陈芳艳(1971一)，女，讲师。硕士 3通讯作者：纪平雄(1956一)，男，副教授． 247 2005．1 全国桑树种质资源及育种和蚕桑综合利用学术研讨会 l 用1％w／w)Na：CO。为脱胶液，在100C条件下对茧壳脱胶60min、洗净、烘千，重复 mol／L 以上操作，得到脱胶率为3l。5％的丝素。此脱胶丝素，用5％(w／w)戊二醛(O．2 pH 8．5硼酸缓冲液配制)于20C交联40 mol／L min后，用0．1 pH7．8磷酸缓冲液洗除多余 mL活力为98。5 戊二醛，真空干燥。称取0。239经戊二醛活化后的丝素(干质量)，加入0．6 U／mL的木瓜蛋白酶液(