黄杆菌肝素酶Ⅱ的克隆及其表达.pdfVIP

黄杆菌肝素酶II的克隆及表达 傅文彬 赵健* 宋聿文 范立强 李素霞 袁勤生 （华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 上海200237） 摘要: 目的 获得高表达黄杆菌肝素酶II工程菌。方法 本文用一对特异性引 物通过PCR从黄杆菌(Flavobacterium heparinum)基因组DNA中扩增出黄杆菌肝素酶 Ⅱ（HpaII）基因，经测序验证后插入到含T 7 启动子的质粒pET-24a上构建表达载 体，重组质粒转化E.coli BL21(DE3)，以1mM IPTG进行诱导表达。结果 SDS聚丙烯 酰胺凝胶电泳(SDS－PA GE) 分析表明, 该工程菌可表达与预期大小相符的约88kD 的融合表达蛋白，在20度和37度培养条件下分别得到上清和包涵体，包涵体表达量 －1 －1 占全菌体蛋白20% 以上，且复性后的包涵体肝素酶活性达500 Ul OD 600 关键词: HpaII; 克隆表达;酶活性；包涵体复性 乙酰肝素酶是人体内正常存在的一种组织酶，主要存在于正常人体组织的胎盘 和免疫器官中，但在肿瘤组织中有着异