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栏目导引 新知初探思维启动 要点突破讲练互动 知能演练轻巧夺冠 第三章 酶的制备及应用 第4节 酶的固定化 学习导航 1.说出固定化酶和固定化细胞的作用和原理。[重、难点] 2.尝试制备固定大肠杆菌细胞。 新知初探思维启动 一、固定化酶 1.含义:通过物理或化学的方法,将____________与________________结合,使酶固定在载体上,并在一定的__________内进行催化反应。 2.方法:共价键结合法、_______、物理吸附法。 水溶性的酶 不溶性的载体 空间范围 包埋法 3.优点 (1)酶的__________,可以反复使用多次。 (2)酶不与产品混合,制品___________。 (3)可极大地降低生产成本。 活性稳定 较易纯化 4.实例:木瓜蛋白酶的固定化过程 取尼龙布浸入等体积的_________________溶液中10 s左右―→盐酸溶液中室温下水解45 min―→蒸馏水冲洗至pH中性―→室温下放入_________溶液中浸泡20 min―→_____缓冲液(pH7.8)反复洗涤―→木瓜蛋白酶溶液中固定3.5 h,温度为_____。 CaCl2溶液和甲醇 戊二醛 磷酸 4 ℃ 二、固定化细胞 1.含义:用适当的载体将_______________固定起来。 2.优点:比固定化酶更____,使用寿命_____。 3.实例:大肠杆菌细胞的固定化 可以用______培养基培养大肠杆菌,取菌液加入_________和____,搅拌均匀,待_________凝固后,切成小块,用生理盐水和蒸馏水洗净,即得到固定化的大肠杆菌细胞。 合成酶的细胞 简捷 更长 液体 生理盐水 琼脂 琼脂凝胶 要点突破讲练互动 要点一 酶固定化的方法 1.包埋法:将酶包裹在多孔性载体中,如包裹在聚丙烯酰胺等高分子凝胶中,或醋酸纤维素等半透性高分子膜中。 2.共价键结合法:将酶分子相互结合,或将其结合到纤维素、琼脂糖、离子交换树脂等载体上的固定方式。 3.物理吸附法:将酶吸附到固体吸附剂表面的固定方式,固体吸附剂多为活性炭、多孔玻璃等。 下列关于酶和细胞的固定,叙述不正确的是( ) A.酶分子很小,宜采用包埋法 B.酶分子很小,宜采用共价键结合法或物理吸附法固定 C.细胞个大,难被吸附或结合 D.细胞宜采用包埋法固定 例1 【解析】 一般来说,酶更适合采用共价键结合法和物理吸附法固定,而细胞多采用包埋法固定。这是由于细胞相对较大,而酶分子很小,个大的细胞难以被吸附或结合,个小的酶容易从包埋材料中漏出。 【答案】 A 【误区警示】 酶和细胞的固定方法容易混淆,酶分子很小,适于用共价键结合法和物理吸附法固定;细胞个大,难以被吸附或结合,多采用包埋法固定。 变式训练 下列有关固定化酶和固定化细胞的说法,错误的是( ) A.固定化酶和固定化细胞的技术包括包埋法、共价键结合法和物理吸附法 B.某种固定化酶的优势在于能催化一系列生化反应 C.固定化酶技术一次只能固定一种酶 D.固定化酶和固定化细胞都能反复使用,但酶的活性不会迅速下降 解析:选B。固定化酶只能固定一种酶,固定化细胞可以固定一系列酶,固定化酶和固定化细胞都能反复使用,但酶的恬性不会很快下降。 要点二 比较直接使用酶、固定化酶、固定化细胞的特点 直接使用酶 固定化酶 固定化细胞 酶种类 一种或几种 一种 一系列酶 催化反应 单一或多种 单一 一系列 营养物质 不需要 不需要 需要 反应底物 大分子、小分子 大分子、小分子 小分子物质 直接使用酶 固定化酶 固定化细胞 优点 催化效率高,耗能少,污染轻等 酶既与反应物结合,又与产物分离;可反复利用 成本低,操作更容易 缺点 对环境条件非常敏感,易失活;不能被再利用;可能影响产品质量 不利于催化一系列的酶促反应 反应物不易与酶接近,特别是大分子物质,反应效果下降等 特别提醒 固定化细胞可以保证细胞的完整性,由于环境条件改变比较小,所以酶的活性较为稳定。 下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述中,正确的是( ) A.固定化细胞技术在多步连续催化反应方面优势明显 B.固定化酶的应用中,要控制好pH、温度和溶解氧量 C.利用固定化酶降解水体中的有机磷农药,需提供适宜的营养条件 D.利用固定化酵母细胞进行发酵,糖类的作用只是作为反应底物 例2 【解析】 固定化酶耐受性比较好,和溶解氧没有关系;利用固定化酶降解水体中的有机磷农药,不需要提供营养条件;利用固定化酵母细胞进行发酵,糖类既可以作为反应底物,也可以作为碳源来调节酵母菌代谢方式。 【答案】 A 变式训练 关于固定化酶中的酶说法正确的是( ) A.酶的种类多样,可催化一系列的酶促反应 B.酶被固定在不溶于水的载体上,可反复利用 C.酶
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