核酸、蛋白技术参数资料、分子量标准及其常用试剂的配制.docVIP

- 核酸、蛋白技术参数资料、分子量标准及常用试剂的配制 一、核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 化合物 分子量 λmax(pH7.0) 1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值 OD280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 CTP 483 271 9000 0.97 GTP 523 253 13700 0.66 UTP 484 262 10000 0.38 dATP 494 259 15200 0.15 dCTP 467 271 9300 0.98 dGTP 507 253 13700 0.66 dTTP 482 267 9600 0.71 2．常用核酸的长度与分子量 核酸 核苷酸数 分子量 λDNA 48502（双链环状） 3.0×107 pBR322 4363（双链） 2.8×106 28SrRNA 4800 1.6×106 23SrRNA 3700 1.2×106 18SrRNA 1900 6.1×105 19SrRNA 1700 5.5×105 5SrRNA 120 3.6×104 tRNA（大肠杆菌） 75 2.5×104 3．常用核酸蛋白换算数据 　　（1）重量换算　　1μg=10-6g　　　　　 1pg=10-12g 　　1ng=10-9g 　　　　　1fg=10-15g 　　（2）分光光度换算：　　1A260双链DNA=50μg/ml 　　1A260单链DNA=30μg/ml 　　1A260单链RNA=40μg/ml 　　（3）DNA摩尔换算：　　1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端　　1μg pBR322 DNA=0.36pmol 　　1pmol 1000bp DNA=0.66μg 　　1pmol pBR322=2.8μg 　　1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿　　1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿　　1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿　　（4）蛋白摩尔换算：　　100pmol分子量100，000蛋白质=10μg 　　100pmol分子量50，000蛋白质=5μg 　　100pmol分子量10，000蛋白质=1μg 　　氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿　　（5）蛋白质/DNA换算：　　1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质　　10，000MW蛋白质=270bp DNA 　　30，000MW蛋白质=810bp DNA 　　50，000MW蛋白质=1.35kb 　　100，000MW蛋白质=2.7kb DNA 4．常用蛋白质分子量标准参照物 （1）高分子量标准参照 （2）中分子量标准参照 （3）低分子量标准参照 肌球蛋白 分子量 磷酸化酶B 97，400 碳酸酐酶 31，00 肌球蛋白 212，000 牛血清白蛋白 66，200 大豆脻蛋白酶 21，500 β-半乳糖甘酶B 116，000 谷氨酶脱氢酶 55，000 抑制剂 磷酸化酶B 97，400 卵白蛋白 42，700 马心肌球蛋白 16，900 牛血清白蛋白 66，200 醛缩酶 40，000 溶菌酶 14，400 过氧化氢酶` 57，000 碳酸酐酶 31，000 肌球蛋白（F1） 8，100 醛缩酶 40，000 大豆脻蛋白酶 21，500 肌球蛋白（F2） 6，200 抑制剂 肌球蛋白（F3） 2，500 溶菌酶 14，400 5．常用DNA分子量标准参照物 λDNA/HindⅢ λDNA/EcoRⅠ λ/HindⅢ+EcoRⅠ pBR322/HaeⅢ 23130 21226 21227 587 123 9416 7421 5148 405 104 6557 5804 4973 504 89 4361 5643 4268 458 80 2322 4843 3530 434 64 2027 3530 2027 267 57 564 1904 234 51 125 1584 213 21 1375 192 18 974 184 11 831 124 7 564 125 常用抗生素溶液 抗生素 贮存液a 工作浓度 浓度 保存条件 严紧型质粒 松弛型质粒 氨苄青霉素 50mg/ml(溶于水) -20℃ 20μg/ml 60μg/ml 羧苄青霉素 50mg/ml(溶于水) -20℃ 20μg/ml 60μg/ml 氯霉素 34mg/ml(溶于乙醇) -20℃ 25μg/ml 170μg/ml 卡那霉素 10mg/ml(溶于水) -20℃ 10μg/ml 50μg/ml 链霉素 10mg/ml(溶于水) -20℃ 10μg/ml 50μg/ml 四环素b 5mg/ml(溶于乙醇) -20℃ 10μg/ml 50μg