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Copyright ? 2010, All Rights Reserved Copyright ? 2010, All Rights Reserved 血清室 Serology Ⅰ、血凝试验(Hemagglutination Inhibition test ) 1、仪器设备准备 a) 微量血凝板:U型、96孔; b) 微型振荡器; c) 移液器; d) 吸头; e) 加样槽; f) 计时器。 2、试剂准备 a) 稀释液(医用生理盐水); b) 标准抗原,标准阳性血清; c) 1%鸡红细胞悬液。 3.1 微量血凝试验(HA) 3、实验操作 每孔加入25ul 1%红细胞悬液 Step 3 震荡均匀,室温孵育30min,观察结果 Step 4 每一列第一孔加入25ul标准抗原,倍比稀释至11孔,弃去25ul。第12孔做空白对照 Step 2 每孔加入25ul稀释液(生理盐水),共三排 Step 1 步骤 每孔25ul稀释液 第一孔25ul标准Ag 弃去25ul 最后一孔空白对照 每孔25ul 1%红细胞悬液 震荡均匀以后 ,室温下孵育30min 后观察结果 示意图表示:本次试验抗原1HA为1:512 因此4HA为 1:128 空白对照,不凝集 凝集现象 2 16 8 4 32 64 128 256 512 3.2 抗原血凝效价的重测定 目的:确保血凝抑制试验时使用抗原的活性 方法:按照4HA浓度配制抗原,其检测步骤与 血凝效价(HA)测定的步骤一致。(共滴三排) 判断:血凝单位不可偏离两个以上稀释度。 结果示意图 空白对照 3.3 微量血凝抑制试验 (HI) 每孔加入25ul配制好的4单位抗原,第12孔做空白对照,震荡均匀,室温孵育30min Step 3 每孔加入25ul 1%红细胞悬液,震荡均匀,室温孵育30min,观察结果 Step 4 第一列加入25ul待检血清,倍比稀释至11孔,弃去25ul。第12孔做空白对照 Step 2 每孔加入25ul稀释液(生理盐水) Step 1 步骤 每孔25ul稀释液 第一孔25ul被检血清 弃去25ul 最后一孔空白对照 每孔25ul配好的4单位抗原 震荡均匀,室温下孵育30min 每孔25ul 1%红细胞悬液 震荡均匀,室温下孵育30min,观察结果 空白对照,不凝集 示意图表示:本次被检血清滴度为 6 如果不加血清,加入抗原,出现凝集为正常 Copyright ? 2010, All Rights Reserved
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