牛SREBP1基因编码区forced+PCR-RFLP多态性及其和生长性状的相关性研究.pdfVIP

牛SREBPl基因编码区forcedPCR．RFLP多态性及其 与生长性状的相关性研究 黄永震1，张恩平1，王璩1，淮永涛1，马亮1，蓝贤勇1，雷初朝1， 张春雷2，王居强3，陈宏1+ (1．西北农林科技大学动物科技学院，陕两省农业分子生物学重点实验室，陕两杨凌，712100：2．徐州师范人学细胞 与分子生物学研究所，江苏徐州，22Ill6：3．河南省肉牛T程技术研究中心，河南郑州，450003) 摘要：研究牛SREBPl基因外显子7的遗传多态性及其对生长性状的影响。本研究以中国四个牛品种 共计1035头个体为实验动物，通过DNA测序技术和forcedPCR．RFLP方法检测该区域的SNPs。结 果显示：该编码区发现一处错义突变，247 bp的PCR产物经过限制性内切酶mnfl消化后经琼脂糖检 指标关联分析后显示，南阳牛个体GG基因型在6月龄的体重和平均日增重显著高于GA基因型个体。 关键词：牛；SREBPI基因；错义突变；forcedPCR．RFLP；生长性状 1材料与方法 1．1试验动物 cattle，NY)血样，采自河南省南阻I市黄牛研究中心保种场；共计265份。秦 南5H牛(Nanyang 川牛(Qinchuancattle，QC)血样，采白陕两省秦川牛原种场和陕西省渭南市临渭【又：；共计235份。 Red 郏县红牛(Jiaxian 红牛良种繁育中心，298份；共计44l份。中国荷斯坦奶牛血样采白陕两草滩牛场奶牛场，共计94份； 四个牛样晶血样总计1035份。样品采集时用ACD抗凝，冰盒迅速带同实验室，．80℃条什卜．保存备川。 用苯酚．氯仿抽提法提取基因组DNA，分光光度计测定浓度后，用灭菌蒸馏水稀释至标准浓度50ng／BL， 4C条件下保存待用。 1．2引物的设计希IPCR扩增 根据GenBank中已发表的牛SREBPl基冈序列(登录号：NC007317．3)设计引物：上游引物 Fl： 5’．GGCGAGGCTTGCTCACAT-3’(nt 5-CCCAGAGCCACC 9587．9604)：‘卜．游引物Rl： CTG 反应程序为：95oC预变性5min：94oC变性30s；59oC复性30s；72oC延伸40S，共35个循环：最 后720C充分延伸10rain；保存于40C。 1．3DNA测序分析与forcedPCR．RFLP检测 采用forced GTCCTTGAGCTCAACGAT I(G^AN{FCI)酶切位点。设计一条．卜．游引物R2：5-CAG cIG刽GT-3’ bp。 1．4数据的统计处理 采片j 16．0软件进行方差分析。对观测剑的基冈型进行计 PopGene软件进行群体遗传分析和SPSS 陕两省“13115”科技创新T程重人科技专项(编号：2008ZDKG．11)项15资助。 ’通讯作者。chenhon91212@263．net． 信息宙*(PIC)口…。以及对多志|I：奇_点的基阅荆频率分布进行Hardy-Weinberg平衡捡验。 2结果 2lDN^测序 住4个牛品种中，分*0挑取其扩增良好的PCR产物，经过试剂盒纯化后职向测序。测序结果与普 通牛序列(登录号：N00073I 7．3)比对．发现在该序列对应的第9807碱基1：々_置拄生GA转换(图 基艘由大冬氮酸突变为天冬酰胺。 。j^ ^n” L．。2l型i出．丛! 国l牛sR皿P，堆【HCxon7第9807碱#GA2女Ⅻ序目 2．2SREBPI基Ⅲ外显r7的Hinf【酶切幽谱 由刿2可知．247 bp的PCR扩增产物经