2015浙科版选修1第四部分《实验十二 乳酸脱氢酶同工酶的分离》word学案1.docVIP

学案 导学诱思 一、乳酸脱氢酶 1．简称：____2．作用：在____________存在下，乳酸脱氢酶能使______产生________，具体反应式见下： ________________________________________________________________________。 1.LDH　 2．氧化型辅酶NAD＋　乳酸　丙酮酸　CH3－CHOH－COOH＋NAD＋LDH,CH3－CO－COOH＋NADH＋H＋ (乳酸)　　　　　　　　　(丙酮酸) 二、同工酶 1．概念：指能____________，但其________________的一组酶。 2．实例：LDH有____种同工酶。 3．LDH同工酶： 结构特点：由____种亚基____和____以不同比例组成的________。 具体类型：______、______、______、______和M4。 存在特点：在动物的________________中，LDH各种同工酶的______不同。 1.催化同一化学反应　酶蛋白的分子组成不同 2．5 3．2　L　M　四聚体　H4　H3M　H2M2　HM3　细胞分化及胚胎发育过程　比例 三、乳酸脱氢酶同工酶的分离实验 1．实验方法：____________法。 2．染色： (1)方法：________法 (2)染色原理：在LDH的作用下，NAD＋被还原为NADH，NADH将______和______传递给甲硫吩嗪(PMS)，还原的甲硫吩嗪再将______和______传递给氯化氮蓝四唑(NBT)，还原的氮蓝四唑呈____色，展现在电泳凝胶上。 3．实验材料：牛的______，其余略。 4．实验步骤： 制备________ ↓ 加样 ↓ ________ ↓ ________ 1.聚丙烯酰胺电泳[ 2．(1)活性染色　(2)电子　H＋　电子　H＋　蓝 3．血清 4．电泳凝胶板　电泳　染色核心解读HEXINJIEDU 1．除了LDH还有哪些酶具有同工酶？ (1)哺乳动物的肝脏中，己糖激酶有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4种同工酶； (2)碱性磷酸酯酶(AKP)有4种同工酶； (3)微生物中也有同工酶，大肠杆菌中天冬氨酸磷酸液酶，共有3种同工酶。 2．LDH同工酶有什么用途？同工酶又有什么应用？ LDH同工酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协助诊断疾病。正常人血清中LDH2LDH1。如有心肌酶释放入血清中，则LDH1LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。临床意义： (1)急性心肌梗塞发作后，早期血清中LDH1和LDH2活性均升高，但LDH1增高更早，更明显，导致LDH1与LDH2的比值升高(2)肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时LDH5都会升高。 (3)患活动性风心肌湿性炎、急性病素性心肌炎、溶血性贫血、肾坏死等病LDH1也可升高。 (4)恶性病变时LDH3常增高。 同工酶是基因表达的产物，生物发育过程中基因的表达受时间和空间的控制，所以同工酶的研究在生理或病理变化、分子进化、育种等方面都有意义。近年来，同工酶检测在有些方面已被DNA标记所取代。但由于同工酶的检测在操作上比检测DNA简便，所以在一定程度上还可发挥作用。 3．LDH活性染色法能否用于定量测定，能否用于比色法测定其他生化反应？ LDH活性染色法可用于溶液的比色定量测定。此法也可用于其他生化的氧化还原反应。但由于NBTH2不溶于水，在琥珀酸脱氢酶测定中，可使PMSH2与溶于水的2,6二氯酚靛酚相偶联而进行比色测定。 4．同工酶能否用SDS聚丙烯酰胺电泳分离？为什么？ SDS是解离剂，而许多同工酶是由2种亚基以不同比例组成的全酶，被解离后进行电泳，获得的是亚基的条带，无法显示同工酶的条带。所以同工酶不能用SDS聚丙烯酰胺电泳分离。 题例领悟TILILINGWU 【例题1】 乳酸脱氢酶能使乳酸发生下列的哪一变化 … (　　) A．乳酸脱氢产生丙酮酸 B．使氧化型辅酶NAD＋分解 C．使乳酸氧化生成CO2、H2O D．使乳酸分解成乙醇[ 解析：本题考查乳酸脱氢酶的作用。根据教材中对其的描述，乳酸脱氢酶(LDH)可以发生以下变化 CH3－CHOH－COOH＋NAD＋ (乳酸)　　　　　(氧化型辅酶NAD＋) CH3－CO－COOH＋NADH＋H＋ (丙酮酸) 所以，正确的答案是A。 答案：A 将乳酸脱氢酶的反应式搞清楚，尤其是各物质的分子简式。 【例题2】 下面对同工酶概念的说法，正确的是… (　　) A．能将不同物质催化反应为同一物质的一组酶 B．能催化同一化学反应，但其酶蛋白分子的组成却不同的一组酶 C．所起的作用都是催化作用的一组酶 D．催化同一个物质生成的物质却不同的一组酶 解析：根据同工酶的概念所述，同工酶是指催化同一化学反应，但其酶蛋白的