HPLC 检测生物素的方法研究[J].pdfVIP

维普资讯 第 37卷第2期 20HD8年4月 发 酵 科 技 通 讯 HPLC检测生物素的方法研究 刘加庆 周丽 田勇 (山东阜丰集团有限公司，山东莒南 276600) 摘 要 ：生物素是人体需要的维生素之一，在生物体具有不可替代的作用。本论文中，主要利用高效 液相色谱仪对生物素的检测进行研 究，经过不断的摸 索，在 215rim 条件 下，利用0．05mol／1的KHpoj 乙腈为9／1的流动相 ，获得生物素较好的峰形和滞留时间。利用此方法制作 了生物素标准品的线性 回归 曲线 ，对糖蜜中的生物素进行定量检测，确定其生物素含量为 37．865g·10一。 酸的代谢等皆需要生物素的参与 。因此 目前，生 前 言 物素 已广泛应用于食品、化工 、医药、畜牧 、生物发 生物素 (biotin)又称维生素 H，化学名称为 酵等领域。尤其在谷氨酸发酵领域 ，由于大多数谷 fhexahydro一2一OXO一1一thieno一3．4-imidazole一4一va— 氨酸菌都是生物素缺陷型的，生物素含量的高低对 lericacid，化学式为 CoH ON2S，分子量 244。早在 生产起着至关重要的作用 ，因此开展对生物素检测 Bateman(1916)和 Boas(1927)发现生蛋清 的毒性 的研究具有重要的意义。 后 ，生物素便作为一种保护因子被分离出来。后来 目前生物素的检测方法主要有微生物法、生物 Gyorgy于 1940年揭示了生物素的功能 ，Vingne— 法、酶法、荧光法、以及高效液相色谱的方法 。其中 and在 1942报道了生物素的结构 ，Harris等(1944) 微生物法应用比较广泛 ，科学家也发现了很多生物 化学合成了生物素I”。生物素的结构如下图： 素缺陷性的酵母或细菌菌株，通过测量这些微生物 f1 生长过程中的OD值 ，间接反应生物素的含量。虽 ／C＼ 然微生物方法的灵敏性较高，但是由于大多数菌株 HN NH 都小是专一性的，因此会带来较大的检测误差 ，并 H C——C H 且整个操作规程费时 、费力。后来通过发现研究，生 l ljCH2--CHz--CH2CHz。COOH 物素和亲和素有很强的亲和力，因此一种利用直接 竞争抑制之问的酶联免疫法(EILISA)应运而生 ，并 ／ 且国外的科学家利用这种亲和力建立 了一种亲和 层析色谱的方法检测生物素的含量 ，但 由于亲和素 图 1—1生物素结构式 的价格昂贵 ，此法难以广泛应用M 。而早期的荧光 Fig．1-1 ChemicalStructureofBiotin 或薄层层析法分析生物素 ，也逐渐由于样品中干扰 生物素是生物生命活动巾必需的维生素之一， 大 ，检测限低等原因被淘汰。在这些方法中，高效液 对动物生理具有不可替代的作用。参加体内许多种 相法由于具有测定速度快、分辨率和灵敏度高等特 羧化反应 (carboxylation)及脱羧反应(c~ecarboxyla— 点 ，而成为生物素测定的首选方法，一些学者已用 tion)，为许多羧化酶所不可缺少 的物质 ，如乙酰辅 该方法测定了多维制剂和饲料中的生