HPVl6E7E6 重组腺病毒的构建及免疫效果评价[J].pdfVIP

．疫苗学． HPVl6E7E6重组腺病毒的构建及免疫效果评价 任皎赵莉 田厚文 高见冯靖庞正 吴小兵谭文杰 阮力 【摘要】 目的构建用于宫颈癌治疗的HPVl6E7E6蓐组腺病毒并评价其免疫效果。方法 根据哺乳细胞使用密码子的偏嗜性设计HPVl6E7E6融合蛋白表达优势密码子基因序列并合成。将 合成的E7E6基因插人腺病毒重组穿棱质粒pOD316后，与AdS腺病毒骨架质粒共转染293细胞，重 组病毒经单斑纯化并进行目的基因插入及表达的鉴定。扩增纯化重组病毒后免疫小鼠，评价其免疫 活性。结果PCR试验证明E7E6密码子优化基因成功插入AdS病毒；Westernblot检测结果表明重 组腺病毒中E7E6优化基因能高效表达，该重组腺病毒免疫C57小鼠后，可诱发强特异性T细胞免疫 应答，在小鼠体内能完全抑制5x104TC一1移植瘤细胞的生长。结论重组HPVl6E7E6腺病毒可作 为治疗HPV慢性感染或宫颈癌的候选疫苗。 【关键词】人乳头瘤病毒16型；宫颈癌；免疫治疗；腺病毒载体 andantitumoroftherecombinantadenoviras E7andE6fussion Immunogenicityefficacy expressing ofHPV16inmiceREN proteins type Jiao．zHAok。TlANHou—wen。GAOJian．FENGJing。PANG l矗ralDiseaseControland Zheng，WUXiao—bing，TANWen-jie，R矾ⅣLi．Institutefor Prevention，China cDC．Be日讯glO0052．China Correspondingauthor：TIAN ttou-wn．Email：houwentian@yahoo．cor／t．cn ToconstructonerecombinantadenovirusAdE7E6 HPVl6E6 IAbstract】0bjective expressing andE7fusion ascandidateforHPVl6 vaccine．MethodsThe E6and protein therapeutic codon．optimized E7 fusedtocreateone insertedintoadenovirusvector gene，were open frame。then pCD316．A reading strainofrecombinantadenoviruswasconstructed in identi． recombinant293cells．and throughhomologous fled PCRandWestern WaS to itrs andthe ofthe by blot．Finally．itemployedstudyimmunogenicityactivity tumor ThePERresultshowedthatE6E7fusion hadbeen inre． growthregression．Results gene integrated cambinantAd5DNA．WestemblottestCOIlfinedthatIheE6E7fusion wag iII293 proteinhighlyexpressed