低剂量恩诺沙星对SPF小鼠肠道菌群的影响的研究.pdfVIP

一 低剂量恩诺沙星 对SPF小鼠肠道菌群的影响研究 刘健华陈杖榴李云何芳文研 10642 (华南农业大学广东省兽药研制与安全评价重点实验室广州5 擒要：目的：采用SPF小鼠动物模型初步研究低荆量恩诺沙星对肠道菌群细菌数量、细菌耐药性和 定植抗力的影响．方法：SPF级小鼠连续饮水给盐酸恩诺沙星钙天，用选择性培养基检测粪便各种细菌 数量的变化、细菌耐药性以及外源大肠杆菌的消除规律．结果：10mg／L和100mg／L恳诺沙星可抑制部分 需氧和兼性厌氧菌的生长；100mg／L恩诺沙星可抑制肠球菌的生长和部分拟杆菌的生长；对双歧杆菌和乳 恩诺沙星可降低部分SPF小鼠肠道菌群对外源细菌的定植抗力．结论：恩诺沙星对肠道菌群的主要影响 是使需氧和兼性厌氧菌的耐药率增加；我国现行规定的恩诺沙星和环丙沙星的ADI可能也会对人体肠道 营群产生影响。 关键词：残留；人体肠道菌群；恩诺沙星；环丙沙星；离体肠道模型 动物性食品中残留的抗菌药可能对人体肠道菌群产生负面影响，如破坏肠道菌群平衡和使肠道 细菌对抗菌药的耐药性增强等。因此，欧美等国家将对人体肠道菌群的影响列为抗菌药残留安全性 评价很重要的一项内容，并由此制定某些抗菌药的日允许摄入量(ADI)【1】。恩诺沙星、单诺沙星 和沙拉沙星作为畜禽专用的氟喹诺酮类药物在兽医临床上已得到了广泛应用，已有许多关于治疗量 氟喹诺酮类药物对肠道细菌作用的资料，但很少有关畜禽专用氟喹诺酮类药物或其残留物对人体肠 道菌群影响的研究【2，3】。离体肠道模拟系统的研究结果表明，低剂量恩诺沙星对人体粪便菌群的主 要影响是使耐药大肠杆菌比例明显增加【4】，但此模型未考虑宿主代谢，且细菌数量低于结肠内实际 数量，因此难以客观地反映活体的情况。国际上已采用人志愿者、普通动物、无菌啮齿动物和携带 人体肠道菌群的啮齿动物(HFA)等活体模型来研究抗菌药对人体肠道菌群的影响，其中HFA鼠是 目前应用最多的活体模型【l5，6】。HFA鼠是将正常人体粪便菌群定植于无菌小鼠肠道而建立的一种 活体模型，考虑到无菌小鼠的来源比较困难，本研究采用SPF小鼠模型从细菌耐药性和菌群定植抗 力方面初步评价了低剂量恩诺沙星对肠道菌群的影响。并探讨SPF小鼠作为抗菌药残留安全性评价 模型的可行性。 l材料与方法 1．1实验动物与分组 5周龄SPF级封闭群NIH雌性小鼠(由第一军医大学实验动物中心提供)转入隔离器之后， 随机分成4组：对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组6只，饲养在同一无菌隔离器中． 饲养温度和湿度分别控制在22℃和50％左右，自由采食和饮水．提供高压灭菌蒸馏水和经 两天更换一次，给药持续48天。给药25天后经饮水给外源性大肠杆菌24hr，以检测肠道菌群的定 8I 植抗力，菌株为环丙沙星和恩诺沙星耐药菌株，菌液浓度为5×10Scfu／m1． 1．2培养基和药品 脑心浸液琼脂(BHI)为Acumedia公司产品，AN厌氧菌琼脂(Anaerobic agar)为Oxoid公 司产品，11PY培养基和脱纤维羊血购自上海疾病控制中心，万古霉素、卡那霉素购自中国药品生物 制品检定所。盐酸思诺沙星购自浙江新昌国邦制药厂．拟杆菌选择性培养基(Bd)：以AN厌氧菌 琼脂为基础，加入万古霉素7．5峙枷，卡那霉素100删g／mL及4％脱纤维羊血I丌． 1．3检测指标与方法 在给药前、给药期和给药后每隔一定时间采集小鼠粪样，每次用Eppenderf管收集小鼠排出的 粪便稀释液震荡混匀，再10倍系列稀释，按常规微生物平板菌落计数法测定各细菌数量。采用EMB、 时在EMB、EC、Bill和Bd培养基中添加一定浓度的环丙沙星，以检测细菌耐药率的变化。 1．4数据处理 实验数据用叉．+SD表示，用t检验分析有关数据的差异显著性． 2结果与分析 2．1 恩诺沙星对SPF小鼠粪便细菌数量的影响 结果如表l所示，中剂量和高剂量组小鼠粪便需氧和兼性厌氧菌数明显低于对照组(尸．o．05或 歧杆菌和乳酸杆菌数量无显著差异。