基因工程导论重点.doc

基因工程导论 1、生物技术：传统生物技术、工业生物发酵技术、现代生物技术（基因工程、蛋白质工程、细胞工程、酶工程和发酵工程）。基因工程：是指在基因水平上，采用与工程设计十分类似的方法，利用分子生物学的手段，在体外操纵、改造、重建细胞的基因组，从而使生物体的遗传性状发生定向变异，获得人们所需的性状，并能稳定地遗传给后代。特点：基因工程能够打破种属的界限，在基因水平上改变生物遗传性。 2、DNA重组：利用供体生物的遗传物质，或人工合成的基因，经过体外或离体的限制酶切割后与适当的载体连接起来形成重组DNA分子，然后在将重组DNA分子导入到受体细胞或受体生物构建转基因生物。 3、基因工程的理论依据：同基因具有相同的物质基础；基因是可以切割的；基因是可以转移的；多肽与基因之间存在对应关系；遗传密码是通用的；基因通过复制可以把信息传递给下一代。 4、基因工程的实施步骤：取得符合人们要求的DNA片段；目的基因与质粒或病毒DNA连接成重组DNA；把重组DNA引入某种细胞；把目的基因能表达的受体细胞挑选出来；形成新的目标产品。 5、基因：DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷段序列，是遗传物质的最小功能单位。外显子：能够编码蛋白质的序列叫做外显子。内显子：不能够编码蛋白质的序列叫做内含子，内含子能转录为信使RNA。 6、原核生物的基因组结构特点：染色体数量少；DNA大多为双螺旋结构，少数以单链形式存在；结构简单，基因组小，DNA一般只有单一复制起点，基因的编码通常是连续的，中间无非编码成分；转录单元，基因组中功能相关的基因常集中在基因组的一个或几个特定部位，形成一个功能单位或转录单元，其活性受到同步调控，它们可被转录为多个mRNA分子，叫多顺反子；存在重叠基因。真核生物的基因组结构特点：染色体数量多，结构复杂；DNA结构，都是双链双螺旋结构，核苷段为线状。含有原核生物不同的染色体核外遗传因子，如线粒体DNA，植物的叶绿体DNA等；基因组大，结构复杂，DNA有多个复制起点。每个基因组中含有数万个基因；含多种不同程度的重复序列；基因家族：真核生物都是单顺反子，即一个结构基因转录一个mRNA分子、翻译一条多肽链。许多功能相关的基因成套组合，形成基因家族；基因编码不连续，含断裂基因。 7、基因多级调控：基因激活→转录起始→转录后加工→mRNA降解→蛋白质翻译→翻译后加工→蛋白质降解。基因转录激活调节基本要素：原核生物—操纵子：启动序列→操纵序列→编码序列；真核生物—顺式作用元件：启动子→增强子→沉默子。调节蛋白：原核生物—特异因子（识别启动序列）、阻遏蛋白（结合操纵序列）、激活蛋白（与启动子附近DNA结合）；真核生物—转录因子（反式作用蛋白和顺式作用蛋白）。 8、原核基因转录调节：操纵子模型、多顺反子、阻遏蛋白调节。 9、真核基因转录调节：DNA水平的基因调控是通过改变基因组中有关基因的数量和顺序结构而实现的基因调控。转录前的调控:组蛋白（正电荷）与带负电荷的DNA结合抑制了基因的转录；非组蛋白原来连接在DNA的某一特定位置上，当非组蛋白磷酸化以后，磷酸基带负电荷，于是非组蛋白与带正电荷的组蛋白结合成复合物，这个复合物与带负电荷的DNA相排斥，就从DNA上脱离下来。这样，使原来与组蛋白结合的那个区段的DNA暴露出来，裸露的这段DNA可被RNA聚合酶识别而开始转录，可以解除组蛋白对基因的抑制作用。转录后调控:在真核细胞中，基因转录的最初产物是前体mRNA，其长度比成熟的mRNA长得多，经过剪切、拼接、戴帽和加尾等加工，才能形成成熟的mRNA。翻译水平的调控:真核生物基因的翻译调控的一个重要作用是控制mRNA的稳定性。在某些真核细胞中的mRNA进入细胞质以后，并不立即作为模板进行蛋白质合成，而是与一些蛋白质结合形成RNA蛋白质(RNP)颗粒。这种状态的mRNA的半衰期可以延长。mRNA的寿命越长，以它为模板进行翻译的次数越多。翻译后调控:真核生物基因翻译的最初产物是一个大的蛋白质分子。有时，必须经酶切成更小的分子才能有生物活性。这个过程属于翻译后修饰。 10、基因工程中的工具酶：限制性核酸内切酶：切割DNA；DNA连接酶：生成3’→5’磷酸二酯键；DNA聚合酶：探针标记、补平3’末端；反转录酶：cDNA合成；多聚核苷酸激酶：5’磷酸化、探针标记；末端转移酶：3’末端多聚尾；碱性磷酸酶：切除末端磷酸基。 11、限制酶：保护宿主不受外来DNA的感染，可降解外来的DNA，从而阻止其复制和整合到细胞中。酶切特点：大部分识别位点的DNA序列具有回文结构；切割DNA均产生含5’-磷酸和3’-羟基的末端；错位切割产生具有5’-或3’突出的黏端；而沿对称轴切割双链DNA产生平端；少数不同的限制酶可识别和切割相同的位点，在一定条件下可选择用这些同尾酶。Ⅱ型限制性内切酶：识别