Cloning and Efficient Expression of Bacillus sp. BH072 tasA Gene in Escherichia coli.pdfVIP

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2017-08-13 发布于湖北
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Trans．TianjinUniv．2015，21：026—031 DOI10．1007／sl2209—0152373—4 CloningandEfficientExpressionofBacillussP．BH072 tasA GeneinEscherichiacoli HanYe(韩烨)，FanJie(樊洁)，ZhouZhijiang(周志江)， TanXiqian(檀茜倩)，ZhaoXin(赵鑫) (SchoolofChemicalEngineeringandTechnology，TianjinUniversity，Tianjin300072，China) ⑥TianjinUniversityandSpringer—VerlagBerlinHeidelberg2015 Abstract：TheBacillusstrainBH072isolatedfrom ahoneysampleshowedstrongantifungalactivityagainstphyto． pathogen．GenecloningtestdemonstratedthatthestrainhadatasA geneencodinganantifungalTasA protein．A1一 thoughthewildstrainsimultaneouslyproducedvariousantiftmgalsubstances，onlythephysicochemicalpropertyand antifungalactivityofTasAproteinwereunclearduetothedifficultyinextraction．Inthisstudy． geneencoding theproteinfrom Bacillussp．BH072wasamplifiedbyusingthepolymerasechainreaction (PCR)methodandcloned intopET28a (+)vector．andthenexpressedinhostcellsEscherichiacoliBL21(DE3)．Theexpressedproteinswere collectedbycentrifugationandultrasonictreatment．andthenpurifiedbyusingnicke1．nitrilotriaceticacid (Ni．NTA) metalafnnitycolumnanddialysismethods．Theresultofsodium dodecylsulfate．polyacrylamidegelelectrophoresis (SDS．PAGE)testshowedthatanexpectedproteinbandappearedwithasizeof31kDa．Theexpressedproductspos． sessedantifungalactivityagainstthephytopathogenicindicatorstrainBotrytiscinerea．A geneticallyengineeredstrain tasA ofE coliwasestablishedinthissutdywhichcanem cientlyexpressTasA protein． Keywords：Bacillus；TasA：cloningandexpression Sincemoreplantpathogenic fungiare emerging， otics．aminoacidsandinsecticidesareproducedbyBacil— funga1diseasesinplantsaremoreandmoreserious．Cur— lussp．ThepotentialofBacillusspeciestosecretevarious rently，thediseasesarecontrolledbyusingresistantculti． peptideswhichhaveshowndistinctcapacit