95个猪场大肠杆菌耐药性与对氨基糖苷类耐药基因的检测.pdfVIP

四川省畜牧善医学会2007年学术年会 95个猪场大肠杆菌耐药性和对氨基糖苷类耐药基因的检测 汤景元1王红宁1_2※，江婷婷2，张鹏举1，曾博2，杨鑫2，刘立2 (1．四川大学‘985工程”西南资源环境与灾害防治科技创新平台，四川大学生命科学学院， 四川大学动物疾病防控生物工程研究中心，成都，610064 2．四川农业大学动物科技学院，雅安四川625014) and Standards 摘要：本研究采用CLSI(Ctinicatlaboratory 川、重庆、湖北等19个省95个规模化猪场分离的480株大肠杆茵对19种广谱抗生紊耐药性进行检测，结果表明： 药，14株出现19重耐药，表明大肠杆菌以多重耐药茵株为主。采用WHONET5．4软件对大肠杆茵耐药性分析，发现 每个猪场都能检测到对链霉素。四环素。强力霉素，萘定酸，恩诺杀星，氨苄青霉素，磺胺甲基异嚼唑。复方新诺 明，阿莫西林，克拉维酸耐药的大肠杆茵；其次是对氯霉素，头孢噻呋钠和环丙杀星。壮观霉素，阿米卡星，头孢噻 肟，多粘菌素B耐药的猪场相对较少，分别是56，29，26，24。采用PCR方法对氨基糖苷类相关耐药基因检测，耐 大霉素(12．45％)，新霉紊(10．56％)。结果表明猪大肠杆菌茵群不仅产生较高的多重耐药性，也成为耐药基因的储存库， 本研究为选择合理药物．控制耐药性提供科学依据。 关键词：大肠杆茵耐药 耐药基因PCR 由致病性大肠杆菌引起的出生仔猪和断奶仔猪腹泻，水肿给养猪业造成巨大的经济损失【ll。然 而，各种抗生素的选择压力不仅导致致病性和条件致病性大肠杆菌产生耐药性，而且动物肠道内常 在大肠杆菌也产生耐药性【21。动物体内常在大肠杆菌不仅通过自身基因突变和外源获得耐药基因产 生耐药性，而且还将耐药基因进行水平和垂直传播，成为动物体内潜在的耐药基因掣引。大肠杆菌 已经被确定耐药性检测的指示菌株，对其耐药性的监测有重要意义【4】。在我国，致病性大肠杆菌耐 药性的检测已经有许多报道，然而对常在大肠杆菌耐药性的调查未见报道口．6’7】。对常在大肠杆菌耐 药性的检测更能够反映猪场的耐药状态，研究大肠杆菌耐药性的流行情况，为选择有效药物，控制 耐药性提供科学依据。 大肠杆菌产生耐药性主要是通过自身基因突变或通过质粒，转座子及其它可移动片段获得外源 耐药基因隅l。耐药基因在细菌耐药中发挥主要作用，因此，耐药基因的检测对防治细菌耐药性，探 索细菌耐药性的机制具有重要意义。在我国兽医|f缶床用药中，氨基糖苷类药物链霉素，新霉素，庆 基金项目：国家“十五”重点科技攻关子课题(2002BA514A-12-5)，国家农业科技成果转化基金项目(合同号： 05EFN215 10(Y2A3) 作者简介：汤景元(1978)男．辽宁海城人，博士生,F-mail：jingyuantangl@163．com。 通讯作者：王红宁。教授，博士生导师，E-mail：whongning@163．com．Tel：028 四川省畜牧善医学会2007年学术年会 大霉素，阿米卡星和壮观霉素被广泛使用，其产生的耐药也比较严重。细菌主要通过产生耐药酶(乙 o】。对氨基糖苷类药物耐 酰转移酶，腺氨酸转移酶，磷酸转移酶)改变药物活性基团，产生耐药性【9’1 药基因的调查有利于更好的防治细菌疾病。同时，我国已经建立了人医的细菌耐药性检测网，检测 不同区域的细菌耐药性动态变化，而兽医上没有建立一个对不同区域猪场耐药性检测的网络。国内 不同区域的细菌耐药性调查对探索细菌耐药性的机制和指导临床用药同样具有重要意义，尤其值得 关注的是细菌耐药表型和耐药基因符合率的分析更有利于发现新的耐药机制。 为了掌握规模化猪场大肠杆菌耐药性流行和分布特点，探索耐药基因的流行和分布特点，为兽 —B法检测临床生产上常用的19种抗生素耐药性；采用PCR方法对4种氨基糖苷类基因进行了检测。 1材料与方法 1．1主要试剂 营养肉汤，营养琼脂培养基，伊红美蓝培养基和麦康凯培养基购自北京奥博星生物技术有限公司。 选用的抗生素种类见表1。氟苯尼考，头孢噻呋钠购自民生药业有限公司，氟苯尼考(FLR，30lag／片)，头