L-精氨酸调控人胃癌细胞株SGC-7901凋亡和机制研究.pdfVIP

第四属全国中西医结合营养学术会议论文资料汇编 舒晓亮1)+康凯1) 张颖琼1)王兰芳2) 【摘要】L．精氨酸(L-Arg)是一种具有抗肿瘤作用的氨基酸，上调机体免疫力和下调细胞因子是 其抗肿瘤的重要机制，近年证实L．Arg具有诱导肿瘤细胞凋亡的潜力，本研究拟以胃癌细胞株 和westernblot技术检测细胞凋亡信号分子的表达与活化，利用RT—PCR方法检测基因的表达等 分子生物学技术对L-Arg调控胃癌细胞凋亡的分子机制进行研究。结果发现L-Arg明显抑制抗凋 的表达．上调促凋亡蛋白p53的表达是L-Arg调控胃癌细胞凋亡的重要机制。 【关键词】L．精氨酸：人胃癌细胞株SGC．7901：凋亡 胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率居恶性肿瘤的第二位，约213的患者 确诊时为中晚期，已不能进行手术根治，由于我们对胃癌由多种增殖信号参与调控肿瘤发展进程 认识有限并缺乏行之有效的防治措施，胃癌的不良预后尚未得到根本改观，5年生存率发达国家 为33％，发展中国家为20．5％[12 的氨基酸．随着人们对L．Arg研究的日益深入，发现L．Arg的生物学功能己超越了氨基酸营养功能 亡不引起炎症反应，因此目前肿瘤治疗药物的研制主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥作用。近年 机制具有极其重要的意义，然而L—Arg是否通过影响细胞凋亡抑制胃癌细胞增殖目前仍然不清 楚。本课题拟在前期研究的基础上首次尝试将L—Arg抗肿瘤的作用拓展到调控胃癌细胞凋亡，对 进一步明确L．Arg调控细胞凋亡的分子机制，利用L．精氨酸预防和治疗胃癌提供重要的理论基 础，既发挥L．精氨酸的营养支持作用，又利用它抑制肿瘤，将为胃癌的治疗提供一种重要的积极的 新方法。 l材料与方法 1．1材料 公司)；胰蛋白酶、二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT) 式细胞仪(美国BD公司)。 第四届全国中西医结合营养学术会议论文资料汇编 1．2胃癌细胞培养及分组 生长，但是，当L．Arg浓度达到100．0mmol ／L时，胃癌细胞增殖明显，因此本研究选择浓度为50mmol／L的Arg作为试验浓度。 1．3MTT法检测细胞的生长情况 将完全培养基换成含有不同浓度水平Arg的培养液，每个剂量设置4个平行对照孔，L—Arg浓度 实验重复3次，判定细胞的生长情况。 1．4Annexin．V．FITC方法检测细胞凋亡 iodide，PI)染 液各5pl，混匀后冰上避光放置15min，用流式细胞仪进行双色检测细胞凋亡情况，每个样品至少 计数10000个细胞，Cell 1．5Western blot检测蛋白表达 为50．0mmol／L的L—Arg作用24h后，PBS后，15000r／ min离心20min，取上清，按细胞浆蛋白分离试剂盒说明书上操作步骤分离细胞蛋白，精确 反应试剂盒进行显色，Bio—Rad化学发光成像系统收集图像。 1．6 RT．PCR方法检测基因的表达 SGC一7901细胞按105／ml接种于25ml培养瓶，24h后加入50．0mmol／ Green， 第四届全国中西医结合营养学术会议论文资料汇编 RT—PCR引物序列根据外文文献【8]，电泳检测扩增产物条件同 胶成像分析仪观察并拍照，Real．time 前(见表1)。 1．7统计处理 统计学处理．应用SPSSl7．0统计软件处理相关科研数据．所有数据用均数士标准差(元is) 表示，组问比较采用t检验．P0．05，统计学上有显著意义。 2结果 2．1L．Arg对胃癌SGC．7901细胞的生长抑制作用 改变，细胞增殖明显(图1)。 O．3 O．7 O．6 O．5 0