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实验进展汇报 实验名称： 军牧1号白猪、杜洛克猪和小型猪核心群氟烷、LPIN1和H-FABP基因的连锁分析 军牧1号白猪、杜洛克和小型猪概况 军牧号白猪由中国人民解放军军需大学(现为吉林大学)1998年自群繁育5个世代 杜洛克原产于原产于美国东部的新泽西州和纽约州等地，主要亲本用纽约州的杜洛克和新泽西州的泽西红杂交育成，原称杜洛克泽西，后称杜洛克小型猪，又称minipig，小型猪是生物医学研究中应用最为广泛的非啮齿类大型之一，具有其它实验动物不可替代的优越性，而且作为异种器官移植最可能的供体成为研究热点。1974年，Christian报道了用氟烷麻醉剂可以诱导猪PSS，PSS的基因称为氟烷基因(Hal)或兰尼受体基因(RYR1)。Minkema (1976)、Marry (1981)、Smith(1977)等提出，HalN和Haln控制，Nn表现为显性。进一步研究表明，PSS是因兰尼受体基因(Ryanodine, Receptor gene，RYR1)，cDNA中的C1843-G突变为T1843-A，615位精氨酸变为半胱氨酸，脂素基因(LPIN)是新近发现的双向调控身体脂肪的一个基因家族其蛋白产物称为脂素(lipin).Lpin1在骨骼肌或脂肪组织中过表达时，会加剧小鼠的肥胖。 猪LPIN1基因位于3q21-27，其编码区为2685 bp，编码894个氨基酸。人、大鼠、小鼠和猪这4个物种的lipin1间的两两蛋白质序列相似性为88.18%~96.43%。 猪LPIN1基因上已鉴定发现了17个SNP。其中有5个SNP位于内切酶的酶切位点上。 分别是： 位于外显子2上的T60C，该位点上的T-C 转换造成了TaqI 限制性内切酶酶切位点（T*CGA）的获得和丢失。与眼肌面积、板油率和肌内脂肪含量存在显著相关。 位于外显子20上的T159A 的T-A 碱基转换造成了Eco88I 限制性酶切位点（C*YCGRG）的丢失和获得。与眼肌宽、眼肌面积、板油率和失水率存在显著相关。 位于外显子20上的C243T 的C-T 碱基颠换造成了Bsh1236I 限制性酶切位点（CG*CG）的获得和丢失。与屠宰率、臀中肌中点背膘宽、6－7肋间膘宽、眼肌高、眼肌宽和板油率存在显著相关。 位于外显子20上的C2040T 的C-T 碱基颠换造成了TaqI 限制性酶切位点（T*CGA）的获得和丢失。与眼肌高、眼肌面积和滴水损失存在显著相关。 位于外显子20上的G1975A 的G-A 碱基颠换造成了PstI（CTGCA*G）限制性酶切位点的获得和丢失。与眼肌高、眼肌宽、眼肌面积、腿臀肉骨率和滴水损失存在显著相关。 本实验将选择位于外显子20上的T159A 的Eco88I 限制性酶切位点和C243T 的Bsh1236I 限制性酶切位点的多态性进行研究。 3.3 H-FABP基因 H-FABP，又称FABP3，是FABP家族中最普遍的一种类型，主要在对脂肪酸高度需求的组织，如心肌、骨骼肌和乳腺中表达，主要作用是协助细胞内脂肪酸转运到特定的细胞器或者细胞膜中，保护细胞膜和酶，调整某些酶类的底物浓度，在心肌和脂肪细胞中沉积甘油三酯。脂肪酸结合蛋白属小分子细胞内蛋白，，H-FABP基因位于6号染色体，1.6 kb的上游调控序列、0.2 kb的3’-端非翻译区、4个外显子(分别编码含24、58、34、17个氨基酸的多肽片段) 和3个内含子(4.2、2.3、1.5 kb) 组成 。猪H-FABP基因存在MspⅠ、HaeⅢ、HinfⅠ酶3个酶切多态位点，H-FABP基因的纯合基因型aa/ dd/ HH与IMF含量呈显著正相关，IMF含量的侯选基因。 先前马焕的实验证实，在军牧1号猪的群体中，未发现有MspI酶切位点的多态性，故本实验仅对HaeⅢ、HinfⅠ酶切位点的多态性进行检测。 3.4 酸肉基因 酸肉基因又叫RN基因(Rendement Napole gene)，是Le Roy最先提出的,包括突变的显性基因RN和正常的隐性基因rn,位于15号染色体的p2.1～2.2 区,周围有多个微卫星标记。RN位点是影响猪肉质加工性状RTN(“Napole”technologicalyield)的主效位点。RN 基因对肉质有显著的影响, RN可使肌糖原含量升高70 % ,而使肌蛋白含量降低。肌糖原含量较高,糖酵解后产生的乳酸量较多,使肌肉的酸度增加。pH在下降后接近于肌肉中结构蛋白等电点,使肌丝之间空隙缩小,引起较低的系水力和较浅的肉色。 Taq酶 60 3 180 1月27日 引物合成 227.5 2月4日 Alw21l内切酶 240 1 240 2月4日 BsrBrl内切酶 120 1 120 2月4日 Hinfl内切酶 120