Bradford法蛋白定量试剂盒.docVIP

Bradford法蛋白定量试剂盒 产品简介：? 目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA?Protein?Assay?Kit)和Bradford法蛋白定量试剂盒(Bradford?Protein?Assay?Kit)?。Bradford?法与传统方法相比，更简单、更稳定、兼容性更好。? Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达5mM。但受高浓度的去垢剂的影响，?故在用Bradford?Protein?Assay?Kit进行蛋白定量的时候，需确保SDS低于0.01%，Triton?X-100低于0.05%，Tween?20,?60,?80低于0.015%。含高浓度去污剂的蛋白定量，建议采用Leagene?BCA?Protein?Assay?Kit。? Leagene?Bradford?Protein?Assay?Kit检测速度很快，少量样品一般只需10min即可完成检测。检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μl。在50~1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 产品组成 编号?名称 SBJ0002 SBJ0002 Storage? 500T 1000T 试剂(A):?G250染色液 100m 200ml 4℃?避光 试剂(B):?蛋白标准(BSA?5mg/ml) 1ml? 2ml -20℃? 主要成分：? 试剂(A):?主要由G250、缓冲液等组成。? 试剂(B):?主要由牛血清白蛋白(BSA)、防腐剂等组成。? ? 自备材料：? 1、?酶标仪或分光光度计?2、?微量移液器?3、?双蒸水?4、?96孔板?? 操作步骤（仅供参考）：? 1、?完全溶解蛋白标准(BSA?5mg/ml)，按蛋白标准:稀释液=1:9进行稀释，如取蛋白标准10μl稀释溶解于稀释液90μl，使终浓度为0.5mg/ml。注意，蛋白样品在什么溶液中，蛋白标准也宜用什么溶液稀释。也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准(BSA?5mg/ml)。? 2、?将标准品按0,?1,?2,?4,?8,?12,?16,?20μl加到96孔板的蛋白标准孔中，加蛋白标准稀释 液补足到20μl。? 3、?加适当体积样品到96孔板的样品孔中，补加标准品稀释液到20μl。? 4、?各孔加入200μl?G250染色液，室温放置3～5min。? 5、?用酶标仪测定A595，或560~610nm之间的其它波长的吸光度。 ?6、?根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。?? 注意事项：? 1、?G250染色液使用前充分混匀。? 2、?G250染色液回复至室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。? 3、?蛋白标准在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。? 4、?待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。? 5、?需可检测560~610nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595nm，并需96孔板。? 6、?建议每次测定时都做标准曲线。因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。? 7、?如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，考虑根据比色皿的最小检测体积。应按比例适当加大BCA工作液的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。? 8、?为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。?? 有效期：?12个月有效。 ????????????????????????? 南京森贝伽生物科技有限公司 025