应用正交设计优化紫花苜蓿愈伤组织诱导的激素配比.pdfVIP

40 GrasslandandTurf (Bimonthly) 2008 No ． 5 (Sum No．130) 应用正交设计优化紫花苜蓿愈伤组织诱导的激素配比 柴燕文 ，马晖玲 ，谢小冬。，刘永财 (1．甘肃农业大学 草业学院，甘肃 兰州 730070；2．兰州大学 生命科学院，甘肃 兰州 730000) 摘要 ：以MS+2，4-D(2．0mg／I)为基本培养基，附加 NAA、6-BA和 KT 3种植物激素，采用正交 试验设计法研 究不同浓度激素配比对和田苜蓿 ，秘鲁苜蓿和甘农 3号苜蓿下胚轴愈伤组织诱导的影响。 结果表 明：对于秘鲁苜蓿和甘农 3号苜蓿 ，最适愈伤组织诱导的培养基均为 MS+2，4-D(2．0mg／L)+ 6一BA(O．5mg／L)+NAA(1．0mg／L)，各因素影响程度为6-BANAAKT。对于和田苜蓿，最适愈伤 组织诱 导的培养基为 MS+2，4-D(2．0mg／L)+6-BA(1_0mg／L)+KT(1．0mg／L)+NAA(1．0 mg／L)，各 因素影响程度为 6一BAKTNAA。 关键词 ：紫花苜蓿 ；正交设计 ；植物激素；愈伤组织诱导 中图分类号：Q94—33；S541．035 文献标识码 ：A 文章编号 ：1009—5500(2008)05—0040—05 紫花苜蓿 (Medicagosativa)为多年生豆科植物， 1 材料和方法 为重要的高蛋白饲料牧草 ，被誉为 “牧草之王”，在畜牧 业生产中占有重要的地位n。由于受基 因资源匮乏、 l。1 试验材料 时间长、工作烦杂等不利因素的影响，限制了传统育种 供试的紫花苜蓿品种有秘鲁苜蓿 、和田苜蓿 、甘农 方法在苜蓿再生方面的研究与应用 。随着分子生物 3号苜蓿，由甘肃农业大学草业学院曹致 中教授提供 。 学和植物基因工程的发展 ，在分子水平上对苜蓿进行 1．2 试验方法 遗传改 良的研究已取得了部分成果 。在植物组织培 1．2．I 外植体的建立 选取子粒饱满、有光泽的苜蓿 养 中，培养基最佳组成的选择 ，除了参考和借鉴以前的 种子 ，用灭菌蒸馏水浸泡 4Omin，然后 75 的酒精浸 工作经验外 ，往往需要依靠传统试验设计 的大量试验 泡 30S至 Imin；无菌水洗涤 1次 ；再转入 0．1 的升 进行筛选 ，不但费时费力而且筛选 出来的组合常常不 汞中浸泡 1O～15min，无菌水冲洗 5次 ；然后用无菌滤 能代表最佳组合。采用正交设计法可用最少的处理组 纸吸干种子表面的液体 ，接种到无激素的MS培养基 合数研究较多的试验 因素，已在农业研 究 中广泛应 上，光周期为 16h，光照强度为 2000ix，日问温度为 用 ]。试验选用秘鲁苜蓿 ，和田苜蓿和甘农 3号苜蓿， 25℃，夜间温度为 18℃。 以无菌苗下胚轴为外植体 ，在 MS基本培养基 中附加 1．2．2 培养方法与条件 将无菌苗 的下胚轴 (3～5 了不同浓度的NAA，6-BA和 KT，采用 L。(3)正交试 mm)接种在 9种诱导愈伤组织培养基上 。每个处理 4 验设计进行了愈伤组织的诱导试验 ，旨在确定紫花苜 次重复，每次重复包含 15个外植体。培养条件 ：温度 蓿愈伤组织诱导的最佳培养基 ，以期提高紫花苜蓿组 24C，弱光培养，培养 25d进行出愈率的统计，并转接 织培养的效率。 到继代培养基上进行继代培养，15d继代 1次。 1．2．3 试验设计 愈伤组织诱 导在以MS为基本培 收稿 日期 ：2008—01—25；修回 日期 ：2008—04—23 养基，2，