游蛇科五种蛇四种组织LDH同工酶凝胶电泳的分析.pdfVIP

维普资讯 ；／一 7 动 物 学 研 究 1995，16 (1)：31—36 CN 53--1040／Q 1SSN 0254-5853 Zoolo~ Research 游蛇科五种蛇 四种组织 LDH 同工酶凝胶 电泳的分析 f 安(畿师范大学生物系芜湖24l0oo) ＆】印e’p一／，)^一 ， ／t摘要本文采用垂直板聚丙烯酰胺凝肢电抹方法，研究了安徽产游蛇科5种蛇的肌、肝、 ’心、肾 4种组织乳酸脱氢酶 (LDH)同工酶。结果表明；蛇类LDH 同工酶存在着明显的组织及种 效的 特异性，可作为一项生化遗传指标用于物种分类及种 问亲缘关系的研究 (史瀛仙，1984~ 李胜垒，1992)。游蛇科是现有蛇类中种类最多的一个科，分布广、形态多样，分科及亚 科教则作者意见不一 (陈壁辉 ，1991)。虎斑游蛇 Natrix啦rinalateralis (Berthold)，水赤 链游 蛇 Natrixannularis (Hallowel1)，乌梢蛇 Zaocysdhumnades (Cantor)，翠青蛇 ophcodrysmajot (Guenther)，赤链蛇 Dinodonrefozonatum (Cantor)分隶游蛇科 4个 属，对它们的形态分类和细胞遗传的研究前人 已作了很多工作(张服基，1984，19881陈 壁辉，199l，杨友金，1986等)。而有关 LDH 同工酶的研究， 尚在 国内外未见有报道。 本文对该 5种蛇的 LDH 同工酶进行了比较研究，以期能对游蛇科种间亲缘关系的研究提 供 4种组织的生化遗传指标。 1 材料和方法 1．1 实验动物 虎斑游蛇 (1早，l8)、乌梢蛇 (2早)，翠青蛇 (18，l早)、水赤链游蛇 (2早，l8)，赤 链蛇 (1早，28)均于 1993年 5月采 自安徽省广德县 ，均为成体 。 1．2 样品制备 活体解剖取出肌、肝、心、肾4种组织，用生理盐水洗 2—3次，取 0．5g洗净并剪 碎，加 5倍体积(w ／v)0．1M (pH7．1)的磷酸缓冲液置玻璃匀浆器中冰浴匀浆 ，匀浆液冷 冻离 o·(5oo0r／min】30rain，取上清液与 0．025％溴酚 蓝一50％甘油液按 4：l混匀，备 本文 1993年 11月 6日牧刊，1994年 7月 29日修 回 姆 维普资讯 32 动 物 学 研 究 16卷 用。 1．3 电泳方法 采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶 电泳分离 LDH 同工酶。凝胶厚度 l0mm，分离胶浓度 T=6．O％；电泳缓冲液为 TfisGly(pHB．3)缓冲液；电泳在 4℃的冰箱 中进行；起始 电压 为 100V，30min后升至 250V，恒压维持 4h。 1．4 同工酶染色夏扫描 同工酶 的染色参照李胜垒 (1992)的方法。染色后凝胶用 7．0％乙酸液制成永久胶片， 供扫描及保存 。扫描采用 日本 岛津 Cs一930薄层双波长扫描仪进行 ，波长为 580nm。 。 LDH 的A 和 B亚基 计算采用 Gerald(1972)方法，即：A亚基=LDH +3／4LDH+ 1／2LDH 1／4LD