甲壳动物血清中凝集素的凝集作用及影响因素.pdfVIP

维普资讯 第 2O卷第 6期 泉州师范学院学报 (自然科学) Vo1．20 No．6 2002年 11月 JournalofQuanzhouNormalCollege(NaturalScience) Nov．2002 甲壳动物血清中凝集素的凝集作用及影响因素 戴聪杰 ，陈寅山 (1．泉州师范学院 生物系 ，福建 泉州 362000；2．福建师范大学 生物工程学院，福建 福州 350007) 摘 要 ：用 8种单细胞藻类对 12种 甲壳动物血清进行检测 ，发现每种 甲壳动物血清至少能凝集 3种 以上的单细胞藻类 ，其 中斜生栅藻 (Scenedesmusobliquus)细胞 的敏感性最强 ，能与受检 的 12 种 甲壳动物血清产生凝集 ．同时进行糖抑制 ，温度 、pH和 ca 影响试验 ．结果表 明，每种凝集素对斜 生栅藻的凝集活性都可被 1种或多糖抑制 。12种 甲壳动物血清凝集素 的温度和 pH适应范围表现不 一 ，但它们的凝集活性都被 EDTA所抑制 ． 关键词 ：甲壳动物 ；凝集素 ；藻类 ；影响因素 中图分类号：Q959．233 文献标识码 ：A 文章编号：1009—8224(2002JO6—0076--06 凝集素是生命体内广泛分布的一种天然 的非免疫性蛋 白或糖蛋白，具有众多的生物学性 质n ]，其中最重要的是能识别细胞表面的糖基团，有选择性地凝集不 同种类 的细胞 ，对凝集 素的筛选和活性检测 ，常用各种脊椎动物红细胞L6]、肿瘤细胞 、淋 巴细胞 、骨髓细胞Lg]、精子 细胞 作凝集原 ，很少使用单细胞藻类和微生物细胞或孢子等．直到 1996年 HoriL1等才 首次报道了植物凝集素对海洋单细胞藻类 的凝集作用 ．本文以8种单细胞藻类为凝集原 ，对 12种 甲壳动物血清凝集素进行检测 ，这将为反过来 以这些凝集素作为分子探针 ，研究藻类细 胞表面的糖脂和糖链结构开辟一条新路 ，并提供基础资料． 1 材料和方法 1．1 甲壳动物血清的制备 选取健康 的 日本对虾 (Penaeus血ponicus)、南美 白对虾 (Penaeusvanaminas)、罗 氏沼虾 (Mac． robrachiumrosenbergil)、日本沼虾 (Macrobrachiumjaponicus)、脊条褶虾蛄 (Lophosquillacostata)、 斑纹婿 (Charybdisferiatus)、日本绒螯蟹 (riocheirjaponicus)、红星梭子蟹 (Portunussanguinolen． tus)、三疣梭子蟹 (Portunustrituberculatus)、远洋梭子蟹 (Portunuspelagicus)、锯缘青蟹 (Scylla serrata)、相手蟹 (Sesarmasp)等 12种 甲壳动物 ，带 回实验室洗净 ，分类鉴别 ．虾类用经过高压灭 菌的 1ml、5号针头注射器从围心室内抽取血样 ．蟹类剪肢放血 ．收集各种 甲壳动物血淋巴液 收稿 日期 ：2002一O4—11 作者简介 ：戴聪杰 (1966一 )，男 ，讲师 ，硕士． 基金项 目：泉州市科技项 目计划资助 (Z200239) 维普资讯 第 6期 戴聪杰等 ：甲壳动物血清中凝集素的凝集作用及影响因素 77 经受 4500rpm(r=15cm)离心 10min，上清液为血清型样品，在血清 中加入达到体积 2倍浓 度的TBS—Ca 溶液 (TBS：0．14mol·L～Nacl，0．01mol·LI1Tris—HCI，pH 7．4；TBS— Ca抖 ：TBS0．01mol·L～CaCI：，pH7．4)，然后经凝集活力和蛋 白质浓度测定后 ，放冰箱备 用 ． 1．2 藻类细胞悬液 的制备 巴夫藻 (Pal0mv~ridis．)、盐藻 (DunaliellⅡ8Ⅱlina)、塔胞藻 (Pyramimonas