生物样本前处理技术.docVIP

【讨论】生物样本前处理技术 样本前处理技术在分析方法中占有极其重要的地位，很多分析问题都可以通过样本前处理解决，本文将对样本前处理过程中遇到的问题和样本前处理方法进行综述，以期形成一个系统。 本文将分为 1.样本分类及采集 2.初步处理 3.游离药物分离 4.萃取技术 5.萃取后过程 五个部分进行分别阐述。 其中有不少为个人观点，希望各位战友能不吝指正（纠正错字，纠正观点，进行讨论都欢迎），希望和园内战友共同学习。 -------------------------------------------------------------------------------- 楼主快点介绍吧。 -------------------------------------------------------------------------------- 1.1 生物样本分类 生物样本多种多样，有血浆、血清、全血、淋巴、唾液、各种组织、毛发、尿液、胆汁、泪液、脊髓液、汗液、乳汁、羊水、粪便以及呼出的气体。（以下文字主要摘自《体内药物分析》姚彤伟编著 2001年）生物样品可大致分为 ①均匀样品：血液、尿液、唾液、胆汁、脑脊液、淋巴液、乳汁和性腺分泌液等体液； ②非均匀样品：心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、生殖器官、脑、体脂、胸腺肾上腺和骨骼肌等11种器官、组织。 Ruth Endacott[1]总结了临床样本采集时需要注意的问题以使采样够用和适用 。 [1]:Endacott R, Botti M. Clinical research 3: sample selection. Intensive Crit Care Nurs. 2005 Feb;21(1):51-5. 1.2 生物样品采集 1.2.1 血样 1.2.1.1 组成 血样包括血浆、血清和全血，其中最常用的是血浆。一般认为，药物在体内达到稳定状态时，血浆中药物浓度是与药物在作用点的浓度紧密相关的，即血浆中药物浓度可以反映药物在体内(靶器官)的状况，而且血浆中药物浓度的数据报道较多，可供借鉴。 欲借助血药浓度来了解药物体内的转运规律和用于剂量调整, 应待药物在血液中分布均匀后再取样。直接抽取动脉血或自心脏取血无疑是最理想的方法，因为动脉血中的药物已充分混匀，但此法仅适用于动物实验研究。就采血方式而言，目前使用较多的方法是自静脉采血，并且视采血次数的多少和实验方法需要，一般每次采血1－5ml。做动物实验时，采血量不宜超过动物总血量的十分之一，以免因血流动力学改变而影响研究结果。表1列出常见动物的采血方法。标准的犬类或猫类动物收集血样方法参见Lucas RL 的综述。血样储存及储存条件参见下表2。 1.2.1.2 血浆及血清 血浆(plasma)的取得是在加肝素、草酸盐、枸橼酸等抗凝剂的全血经离心后分取上层清液，其量约为全血的一半。血清(serum)则是由血液中纤维蛋白原等影响下引起血块凝结而析出，离心后取上层清液而得，血块凝结时，往往易造成药物吸附的损失。通过制备后的血清一般可以得到全血的40%，而血浆会比血清多，大约占全血的50％，个体差异较大 。 血清和血浆有以下三点区别：1。 血清中没有纤维蛋白原 2。 血清中无参与凝血机制的血浆蛋白 3。 血浆无一些凝血过程中血小板释放的物质。 在药代研究中两者各有优缺点： 1。 血浆中含有抗凝物质（肝素或EDTA），可能会干扰化合物的检测（结合等），血清则无。 2。 血浆中蛋白稍多，可能会在SPE中产生诸如堵柱子等情况，干扰样本制备过程（这一点其实差别不明显）。 3。 血浆制备快速，直接低温或常温离心后即可分离，血清制备耗时较长。这一点对药代试验影响较大，因为给药后4小时内一般取血点都较为密集。 但血清分离胶的出现可解决这个问题，详见本文2.1.2节。 4。 血清的凝血过程可能会因为与药物产生吸附作用，从而减少血清的含量，并且有可能造成浓度不平行现象。 血样采取量受到一定限制，尤其是连续取样时，病人感到负担，不易得到配合。血样一般每次取1-5mL，但随着高灵敏度测定方法的建立，取样可少到0.1-0.3mL，可改用手指取血，从而易为受试者接受。 1.2.1.3 全血 全血(whole blood)也应加入抗凝剂混匀，防止凝血。 对大多数药物来说，血浆浓度与红细胞中浓度成正比，全血不能提供更多数据，全血药物浓度往往不能很好反映药物的药理作用强度，不能作为作用部位药浓的可靠指标。常选用血浆或血清进行体内药物分析，其原因如下： 1. 血细胞中药物暂时仅作为药物“储库”而失去药理作用，不是反映作用部位药浓的改变，因而不能与药效建立相关关系。 2. 血细胞密集现象。有一些药物如米帕林，它主要集中于白细胞内，只要有生理病理因素导致白细胞增加，