大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究.pdfVIP

维普资讯 第 27卷第 6期 家畜生态学报 Vo1．27No．6 2006年 l1月 ActaEcologiaeAnimalisDomastici Nov．2006 大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究 王 幸，马秋枝，刘 强． (南京农业大学动物科技学院，江苏 南京 210095) [摘 要] 大豆种子经过漫提、离心、硫酸铵逐级沉淀和 )【-半乳糖一Epoxy—Sepharose-4B亲和 层析，获得单一的大豆凝集素(SoybeanagglutininSBA)样品。纯化的大豆凝集素经 pH8．9 的聚丙烯酰胺凝胶 电泳(胶浓度 7．5 )，可以显示一条清晰的着色带。在血凝活性鉴定中，采 用2 免细胞悬液，测定凝集红细胞的能力和检测它们与糖结合后对红细胞 的凝集作用 的影 响。结果表明，使兔红细胞 5O2，6凝集的蛋白质最低浓度为 4~tg／mL左右。浓度为 0．1mg／ml 凝集素溶液分别与 )【-半乳糖、I)-氨基半乳糖、异丙基一8一I)．硫代半乳糖苷(IPTG)、a一乳糖、几 丁质溶液结合后 ，使兔红细胞5O 凝集的糖配体溶液浓度分别为 lmg／ml、2．5mg／ml、10mg／ ml、30mg／ml，而几丁质几乎对SBA没有影响。 [关键词] 大豆凝集素；纯化；血凝}糖配体 [中圈分类号] S811．5 [文献标识码] A [文章编号] 1004—5228(2006)06-0057-04 凝集索是 自然界广泛存在的一大类能凝集细胞、 后与2倍体积的正庚烷混合脱脂，搅拌3h后抽滤， 多糖或糖复合物的非免疫来源的糖类结合蛋白，具有 脱脂的大豆粗粉静置过夜至完全干燥[1。。，用 2倍体 众多的生物学活性，其中之一就是能使动物红细胞凝 积的0．15mol／L浓度的NaC1混合浸提，室温下搅 集。凝集素已成为生物化学、细胞学、免疫学及医学 拌3h，4℃下2500rpm离心 lh，取上清液，再在4℃ 等领域中重要的科研材料，并被广泛应用[1叫]。大豆 下8500g／min离心30min。取上清液，加入 固体硫 凝集素是最早被描述的植物凝集素之一，通常所说的 酸铵至4O 饱和度，4℃下静置 4h，8500rpm离心 大豆凝集索是指对 N_乙酰基 I)-半乳糖胺／D-半乳糖 30min。去除沉淀，在上清液 中加入 固体硫酸铵至 有结合特异性的一类糖蛋白，是大豆中主要的抗营养 8O 饱和度，4C下静置 4h，8500rpm离心 30min。 因子之一 由于大豆凝集素具有专一的并可逆的结 沉淀溶解予0．15mol／L浓度的NaC1溶液中，溶解 合糖及糖蛋 白的特性，故本实验利用亲和层析的方法 物对0．15mol／L浓度的NaCI溶液透析过夜，至外 分离纯化得到单一的大豆凝集索样品[11]，并对其血 透液测不出SO ，透析液在 4℃下 15000rpm离心 凝活性进行了研究E2,S,7]，旨在探索不同糖配体对大豆 30min，得大豆凝集索粗品，用于亲和层析[1卜垤]。 凝集素的血凝活性的影响n]。 1．2．2 galactosyl--Sepharose亲和吸附荆的制备 Sepharose4B用200mL蒸馏水淋洗过一玻璃滤器， 1 材料和方法 剩下的水由吸取器吸走．脱气后的凝胶 (10g)悬浮予4 1．1 材 料 MoLNaOH溶液 加入 18．75nag硼氢化钠(N{出H4)， 1．1．1 大豆种子从南京农业大学大豆改 良中心