半夏软腐病内生拮抗放线茵的分离与鉴定.pdfVIP

浙江理工大学学报 ，第 28卷，第 1期，2011年 1月 JournalofZhejiangSci—TechUniversity Vo1．28，No．1，Jan．2011 文章编号：1673—3851(2011)01—0092—04 半夏软腐病 内生拮抗放线茵的分离与鉴定 李艳华，董 飞，胡秀芳 (浙2r-~工大学生命科学学院，杭州 310018) 摘 要：针对半夏生产过程 中软腐病废水普遍和危害严重的现状，从 7个半夏主产区的半夏植株上分离到 47 个内生放线茵，通过平板和组培苗拮抗活性筛选获得两个具有较强活性的菌株 07JX3—2和 o7JX3—7，经形态、培养特 征和生理生化实验鉴定，初步确定两个分离物均属于链霉菌属 (streptomyces)，至于其所在种有待进一步鉴定。两个 拮抗菌株的获得为半夏软腐病的生物防治研究和应用奠定了基础。 关键词：半夏；内生放线茵；拮抗；分离；鉴定 中图分类号：Q939．13 文献标识码 ：A 0 引 言 半夏(Pinelliaternata(Thunb．)Breit．)为天南星科半夏属多年生草本植物，是一种重要的药用植 物l】]。其性温、味辛，具有镇咳祛痰、降逆止呕、消痞散结、抗心律失常、降血脂、抗肿瘤、抗早孕、镇静催眠和 解毒抗炎、降血压等功效，I临床应用十分广泛[3]。据 558个中药处方微机分析，半夏出现频率位于第 22位， 日本 210个法定汉方中含半夏者 46个，半夏在东南亚其它国家应用也十分普遍。 半夏具有广阔的市场 ，然而多年来由于对野生半夏资源的乱采滥挖 ，土地资源的不断减少，加上化肥、农 药、除草剂的广泛的施用，导致半夏野生资源已近枯竭。为解决供需矛盾和保护野生资源，我国从 2O世纪 70年代开始半夏野生变家种及其栽培技术研究[4]。半夏人工栽培后，由于生态环境的改变，常发生病虫害， 使产量降低，质量变劣。尤其在高温多湿环境中，半夏易受细菌、真菌等病原的侵染而导致腐烂病、烫叶病E] 等，危害普遍而严重。据统计，半夏块茎腐烂率为35 ～47．5 ，目前多用百菌清、多菌灵等多种化学农药 进行防治[6]，但长期、反复和大量使用农药，不仅引起环境污染、农残增加，直接危害人类健康 ；而且 同时破坏 微生态平衡，新的安全有效的病害防治途径对中药材的生产极其关键 。 生物防治是当前已得到重视的安全、有效和持久的植病防治措施。利用生物防治中药材病害，不仅能够 保护土壤中有益微生物的数量，保持生态平衡 ；而且与化学防治相 比，可减少农药对环境的污染及其在药材 中的残留，因此适应了中药材规范化种植的要求，具有广阔的应用前景。 本文针对半夏栽培过程中软腐病病害，分离拮抗放线菌，以期为半夏软腐病的生物防治提供材料。 1 材料与方法 1_1 实验材料 样品来源：2006年 5月至 11月分别从山东、浙江、安徽、甘肃、四川、贵州、江西等半夏种植地采集健康 收稿 日期：2O10一O1-08 基金项 目：国家863科技计划项 目(2006AA10Z428) 作者简介 ：李艳华 (1982一)，女，山东滨州人，硕士研究生，从事微生物防治研究。 通讯作者：胡秀芳，电子邮箱：huxiuf@zstu．edu．cn 第 1期 李艳华等：半夏软腐病内生拮抗放线菌的分离与鉴定 93 和发病较轻的半夏植株，保存于牛皮纸袋，立即带回实验室进行内生放线菌的分离。 半夏软腐病原菌：由浙江理工大学生物工程研究所分离保存的胡萝 卜果胶杆菌胡萝 卜亚种(Pectobacte— riumCaYOtOVOFblgllsubsp．carotovorum)SXR1菌株。 1．2 实验方法 1．2．1 放线菌分离 将半夏植株用 自来水充分冲洗后，将根、球茎、茎分离。根进一步用超声波清洗；球茎去皮后，分别用 70 乙醇浸泡 10~15s，再用 3 次氯酸钠浸泡 2rain，无菌水冲洗 5次。取消毒后的根、球茎和茎分别放人 无菌碾钵中，加 2mL无菌水，充分碾磨 。静置 15rain后，取其悬浮液用无菌水进行系列梯度稀释。将 100 L~yJi稀释液涂布于高氏一号培养基上，28~C培养 7～10d。设置印迹对照和无菌水最后一次冲洗液 对照，进行消毒效果验证，以保证分离的菌为内生菌。 1．2．2 拮抗菌