生物反应器培养CHO细胞的生长与代谢研究.pdfVIP

云南大 学学报 ( 自然科 学版) , 2002 , 24 ( 5) : 388～392 CN 53 - 1045/ N　ISSN 0258 - 7971 Journal of Yunnan University 生物反应器培养 CHO 细胞的生长与代谢研究 孙明波 , 李卫东 , 吴炳元 , 余 　华 , 衡 　燮 , 廖国阳 , 姜述德 ( 中国医学科学院 中国协和医科大学 医学生物学研究所 ,云南 昆明　650118) 摘要 :在搅拌式生物反应器中 ,应用批培养 、流加培养和灌流培养 3 种方法对 CHO - k1 细胞进行了培养. 3 6 6 6 - 1 种方法最大活细胞密度分别达到了2. 0 ×10 ,2. 7 ×10 和 9. 6 ×10 mL . 对培养过程中葡萄糖和氨基酸及代 谢产物氨和乳酸的动态变化进行了检测和分析. 结果表明 ,CHO 细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的摄取以及氨和乳 酸的产生与培养液中葡萄糖和谷氨酰胺的浓度正相关 ,培养过程中控制葡萄糖和谷氨酰胺的加入量能够明显 降低氨和乳酸的产生 ,提高代谢效率 ,增加细胞产量. 关键词 :CHO - k1 细胞 ;生物反应器 ;生长 ;代谢 ( ) 中图分类号 :Q 251 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :0258 - 7971 2002 04 - 0388 - 05 　　CHO - k1 细胞作为基因工程的受体细胞 , 已 1 . 4 　培养方法 经表达了许多制品 ,如 U K ,t - PA , 和乙肝基因工 ( 1) 批培养 :培养基中葡萄糖和谷酰胺浓度分 程疫苗等. 利用 CHO 细胞表达生物制品 , 是 目前 别为 17 和 4. 5 mmol/ L ,微载体加入 3 g/ L ,细胞接 生物工程研究的重要课题之一[1 ,2 ] . 生物反应器大 种量为 1. 5 ×105 mL - 1 . 细胞和培养基一次性加 规模培养细胞技术的应用 ,对于用 CHO 细胞大量 入 ,培养至 138 h 结束. 制备各种制品有着十分重要的意义. 为此 ,我们用 (2) 流加培养 :培养基中葡萄糖和谷酰胺浓度 搅拌式生物反应器 , 采用不 同培养方法培养 了 分别为 12 和 2. 5 mmol/ L . 流加液含葡萄糖 100 CHO 细胞 ,对发酵过程中细胞的生长 、营养物质代 mmol/ L ,谷酰胺 80 mmol/ L . 微载体加入 3 g/ L . 培 谢等进行了研究 ,为优化培养条件 ,探索较为合理 养至 34 h 开始流加 ,流加量随培养时间的延长而 的培养方法打下基础. 逐渐增加 , 由0～1 mL/ h ,培养至 158 h 结束. (3) 灌流培养 :培养基中葡萄糖和谷酰胺分别 1 　材料和方法 为 12 和 4 mmol/ L ,微载体加量 5 g/ L . 灌流液组分 1. 1 　设备 　荷兰 Applikon 发酵罐 ,工作体积 2 L . 与培基相同 ,灌流量随培养时间的延